ミュータントHSPを用いたストレス蛋白質のシャペロン活性発現機構の解析

利用突变体HSP分析应激蛋白伴侣活性表达机制

基本信息

批准号：
09276201
负责人：
伊藤英晃
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Akita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09276201/
关键词：
シャペロンストレス蛋白質熱ショック蛋白質

项目摘要

HSP60のcDNAクローニングが終了し、ヒトHSP60のcDNAを得た。得られたcDNAをもとにレコンビナントプロテインを発現させ、シャペロン活性を測定した結果、ミトコンドリア膜通過シグナル配列の有無にかかわらず、シャペロン活性を確認できた。我々が蛋白質レベルで提唱したように、シグナル配列を有したHSP60(細胞質タイプ)は、シグナル配列のないHSP60(ミトコンドリアタイプ)と同一機能を示し、生理機能を有したHSP60が細胞質にも存在することを分子レベルでも確認した。HSP60のミトコンドリア移行メカニズムに関して解析中である。HSP70,HSP90に関しては、レコンビナント(ミュータント)、またはディリーションプロテインを作製し、各HSPに対するシャペロン活性阻害剤や促進剤等の解析と共に、各HSPのシャペロン活性発現部位等を解析している。さらに、新種のATP結合蛋白質を見いだし、この蛋白質がシャペロン活性を有していることを報告した。この蛋白質のアミノ酸配列はデータバンクには登録されておらず、全く新しい蛋白質であり、分子レベルでの解析を目的に、現在cDNAクローニングを試みている。また、動物モデルを用いた実験では、HSP72/73,HSP60等の事前誘導が急性腎不全や、小腸障害を抑制または軽減させることや、ゲンタマイシン等の抗生剤による腎障害にこれらのHSPが深く関与することを報告した。

HSP60的cDNA克隆完成，并获得了人类HSP60 cDNA。基于获得的cDNA表达重组蛋白，并测量伴侣活性，并且无论是否存在线粒体膜跨膜信号序列，都确认了伴侣活性。正如我们在蛋白质水平上提出的那样，具有信号序列的HSP60（细胞质类型）表现出与没有信号序列的HSP60（线粒体类型）相同的功能，并且我们确认在细胞质中也存在具有生理功能的HSP60。 HSP60的线粒体迁移机制目前正在分析中。关于HSP70和HSP90，产生重组（突变体）或分布蛋白，并为每个HSP分析伴侣活性抑制剂和启动子，并分析每个HSP的伴侣活性表达位点。此外，我们发现了一种新的ATP结合蛋白，并报告说该蛋白具有伴侣活性。该蛋白的氨基酸序列未在数据库中注册，是一种全新的蛋白质，目前正在尝试进行分子分析cDNA克隆。此外，在使用动物模型的实验中，我们报告说，HSP72/73，HSP60等的先前诱导会抑制或减少急性肾衰竭和小肠道疾病，并且这些HSP与诸如庆大霉素等抗生素引起的肾脏损害深深涉及肾脏损害。