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酵母の形質転換(DNA輸送)機構の解明

阐明酵母转化（DNA运输）机制

基本信息

批准号：
16658037
负责人：
村田幸作
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、酵母の形質転換(DNA輸送)機構の更に詳細な知見を得るため、形質転換プロセスの可視化を行った。また、本DNA輸送において重要な役割を果たすと予想されるPan1pの機能解析も試みた。標識試薬YOYO-1はDNAと強く結合し、かつDNAと結合したときのみ蛍光を発する。しかも、YOYO-1は細胞膜を通過しない。本研究では、YOYO-1で標識したDNA(YOYO-1/DNA)を用いて酵母細胞の形質転換を行い、同複合体を蛍光顕微鏡で追跡した。その結果、最初にYOYO-1/DNAが酵母細胞壁周辺を染色する様子が観察された。更に詳細な情報を得るため、Nanogoldで標識したDNA(Nanogold/DNA)を用いて、電子顕微鏡により観察したところ、Nanogold/DNAが細胞壁周辺に結合していた。これは、蛍光顕微鏡による観察結果と一致した。更に、Nanogold/DNAが細胞壁内、細胞膜周辺、及び細胞内にも観察された。特に、Nanogold/DNAが細胞膜の陥入に伴い、エンドサイトーシス様の細胞膜陥入、即ち「超チャネル」により細胞内に取り込まれる様子を観察することに成功した。酵母「超チャネル」の分子機構を明らかにするため、本「超チャネル」において重要な役割を果たすと予想されるPan1pに着目した。Pan1pは、多様なドメインから構成され、各ドメインが多くのエンドサイトーシス(細胞膜陥入)因子と相互作用する。従って、Pan1pにおいて、細胞膜陥入と形質転換に必須の領域を明らかにすることにより、Pan1pを介した細胞膜陥入過程の詳細な知見が得られると期待した。本研究では、少なくともPanlp生育必須領域が細胞膜陥入と形質転換に必須の領域であることを明らかにした。

In this study, more detailed knowledge and visualization of the DNA transport mechanism in yeast were obtained. The function analysis of Pan1p was carried out in order to analyze the important function of Pan1p. Identification test YOYO-1 DNA binding, DNA binding and light emission YOYO-1 cell membrane through. In this study, YOYO-1 DNA (YOYO-1/DNA) was used to detect the morphological changes in yeast cells, and the same complex was traced by light microscopy. As a result, YOYO-1/DNA was initially detected in yeast cell walls. For more detailed information, Nanogold identification DNA (Nanogold/DNA) is detected by electron microscopy, and Nanogold/DNA is combined with cell wall circumference. The results of this study were consistent with those of the previous study. In addition, Nanogold/DNA is detected in cell walls, cell membranes, and intracellular cells. In particular, Nanogold/DNA is involved in cell membrane penetration, cell membrane penetration, i.e., intracellular detection of cell membrane penetration The molecular mechanism of yeast "super-organism" is very important. Pan1 p is composed of multiple factors, and each factor interacts with multiple factors. The detailed understanding of the cell membrane penetration process is expected. In this study, the necessary field of cell membrane transformation was studied.