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Gタンパク質共役受容体のオリゴマー形成による機能調節機構

G蛋白偶联受体寡聚化的功能调节机制

基本信息

批准号：
16659078
负责人：
中田裕康
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究はGPCRの新しい機能調節機構として注目されているGPCRダイマー形成の機能は依然と未知の点が多い。今回、GPCRダイマー形成と機能を明らかにする目的で、アデノシン受容体A_<2A>サブタイプ(A_<2A>R)とドーパミン受容体D_2サブタイプ(D_2R)とのダイマー形成をモデルとして、分子レベルで解明することをめざした。両受容体のヘテロ複合体を効率よく安定に細胞に発現させることは単に共発現させただけでは効率が低く、一般的には非常に困難である。そこで受容体をコバレントに結合させることを考案した。すなわち、両受容体の間に別の細胞膜貫通ドメイン(type II TM proteinであるODR4を用いた)をっなぎ合わせ、両受容体がC端とN端を介して融合され、かつ受容体のトポロジーが単独発現と同様になるように工夫したDNAコンストラクトを作成した。培養細胞にトランスフェクトさせ放射性標識リガンドを用いた結合実験によって分析したところ、天然のA_<2A>R/D_2Rヘテロ複合体と同等の性質を保持していることを確認した。さらに条件検討を重ね、複数個の膜タンパク質から成る複合体を、機能性一本鎖ポリペプチドとして遺伝子工学的に作製する融合タンパク質発現系を確立した。このような一本鎖GPCRダイマーは培養細胞膜に発現すること、受容体機能を保持していることも明らかにした。このように受容体活性を有する一本鎖GPCR複合体を作製することよって、細胞膜表面上ですべてのA_<2A>RやD_2R分子をホモ・ヘテロニ量体として発現させることが可能となり、GPCR二量体の機能を詳細に解析できるようになった。

In this study, the new regulatory mechanism of GPCR was studied, and the function of GPCR was still unknown. Now, the GPCR's function is to form <2A>a clear target, and a clear target<2A>. The rate of cell development is low, and the rate of cell development is very low. The first is the first time that a person has ever been involved in an investigation. The cell membrane penetration between the receptor and the receptor (type II TM protein, ODR4) is fused, the receptor is fused between the C and N termini, and the receptor is isolated and the DNA is produced. Culture of the cell and the use of radioactive markers in combination with the analysis of natural A_<2A>R/D_2R complexes and the preservation of equivalent properties In this paper, we discuss the condition of multiple membrane complexes, and establish a functional system for the synthesis of multiple membrane complexes. The cell membrane of the cell culture was developed and the receptor function was maintained. A locked-in GPCR complex is produced on the surface of the cell membrane by a locked-in receptor activity. The function of the <2A>GPCR complex is analyzed in detail.