ヒトサイトメガロウイルス感染に必須な宿主細胞遺伝子の遺伝子トラップ法による同定
ヒトサイトメガロウイルス感染に必須な宿主細胞遺伝子の遺伝子トラップ法による同定
批准号:
16659122
负责人:
井上 直樹
金额:
$2.18万
依托单位国家:
日本
项目类别:
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份:
2004
资助国家:
日本
项目状态:
已结题
起止时间:
2004 至 2005
中文摘要
1.スプライシングアクセプターとIRES配列の下流にneo遺伝子を配し、loxPを含み転写開始活性がない3'LTRをもつMLV由来のレトロウイルスベクター産生用のプラスミドを構築した。このプラスミドとVSV-G蛋白をコードするプラスミドをMLVのgag-polを産生するパッケージング細胞にトランスフェクトしてレトロウイルスベクターを得た。得られたベクターの力価をHeLa細胞を用いて測定したところ約10^4/mlであったが、CMV感受性細胞であるテロメラーゼ遺伝子により不死化された繊維芽細胞hTERT-BJ1、神経芽種由来細胞株U373MG、及び網膜上皮由来細胞株ARPEでの力価は約10^3/mlと低かった。作製した約10^4の細胞ライブラリーを限界希釈後、96穴プレートにて培養し、いくつかのレプリカを用意した。各ウェルにCMV感染後、CMV産物によりガンシクロビル(GCV)が活性化され感染細胞は死滅することを利用してGCV存在下で培養し生き残る細胞があるかを検討したが、この方法での選択からは変異細胞を得ることができなかった。そこで、LacZを発現するCMV株を感染させ、Xgalによる染色での選択も検討した。その結果、CMVに対して若干感受性が低下したと思われる細胞株を数株得たが、細胞そのものの増殖性が低下し培養が困難なためその後の解析ができなかった。2.CMV実験室株は繊維芽細胞トロピズムを有するが、内皮細胞トロピズムを失っている。一方、新鮮分離株は内皮細胞トロピズムも有する。この差をもたらす宿主因子を検討するために、テロメラーゼ遺伝子を導入し不死化させた臍帯血管内皮細胞を樹立し、内皮細胞トロピズムCMVに対する感受性を確認した。また、CMV感染によりISG54K遺伝子の活性化やIL-6の産生誘導が起こること、staurosporinにより誘導したアポトーシスが抑制されることなどを見出した。
英文摘要
1.スプライシングアクセプターとIRES配列の下流にneo遺伝子を配し、loxPを含み転写開始活性がない3'LTRをもつMLV由来のレトロウイルスベクター産生用のプラスミドを構築した。このプラスミドとVSV-G蛋白をコードするプラスミドをMLVのgag-polを産生するパッケージング細胞にトランスフェクトしてレトロウイルスベクターを得た。得られたベクターの力価をHeLa細胞を用いて測定したところ約10^4/mlであったが、CMV感受性細胞であるテロメラーゼ遺伝子により不死化された繊維芽細胞hTERT-BJ1、神経芽種由来細胞株U373MG、及び網膜上皮由来細胞株ARPEでの力価は約10^3/mlと低かった。作製した約10^4の細胞ライブラリーを限界希釈後、96穴プレートにて培養し、いくつかのレプリカを用意した。各ウェルにCMV感染後、CMV産物によりガンシクロビル(GCV)が活性化され感染細胞は死滅することを利用してGCV存在下で培養し生き残る細胞があるかを検討したが、この方法での選択からは変異細胞を得ることができなかった。そこで、LacZを発現するCMV株を感染させ、Xgalによる染色での選択も検討した。その結果、CMVに対して若干感受性が低下したと思われる細胞株を数株得たが、細胞そのものの増殖性が低下し培養が困難なためその後の解析ができなかった。2.CMV実験室株は繊維芽細胞トロピズムを有するが、内皮細胞トロピズムを失っている。一方、新鮮分離株は内皮細胞トロピズムも有する。この差をもたらす宿主因子を検討するために、テロメラーゼ遺伝子を導入し不死化させた臍帯血管内皮細胞を樹立し、内皮細胞トロピズムCMVに対する感受性を確認した。また、CMV感染によりISG54K遺伝子の活性化やIL-6の産生誘導が起こること、staurosporinにより誘導したアポトーシスが抑制されることなどを見出した。
期刊论文(6)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
HCMVのゲノム構造と遺伝子機能
HCMV基因组结构和基因功能
DOI:
--
发表时间:
2006
期刊:
日本臨床 64・3
影响因子:
--
作者:
[Mizutani T, Fukushi S, Saijo M, Kurane I, Morikawa S., 田口文広, Taguchi F, 井上直樹]
通讯作者:
井上直樹
CMVの先天性感染機構
CMV先天性感染机制
DOI:
--
发表时间:
2006
期刊:
日本臨床 64・3
影响因子:
--
作者:
[Mizutani T, Fukushi S, Saijo M, Kurane I, Morikawa S., 田口文広, Taguchi F, 井上直樹, 野澤直樹]
通讯作者:
野澤直樹
百済における将軍号受容と官位制―古代東アジア世界の史的動向解明のための基礎的研究
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批准号:22K13223
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项目类别:Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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资助金额:$0.83万
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财政年份:2022
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负责人:井上 直樹
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依托单位:
抗ヘルペスウイルス剤耐性の迅速検索用細胞株の樹立と複製開始に特異的な阻害剤の創製
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批准号:16017312
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项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
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资助金额:$5.38万
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财政年份:2004
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负责人:井上 直樹
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依托单位:
病因不明皮膚疾患におけるヘルペスウイルス感染の役割の検討と新規ヘルペスウイルス検査法の開発
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批准号:04F04590
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项目类别:Grant-in-Aid for JSPS Fellows
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资助金额:$0.38万
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财政年份:2004
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负责人:井上 直樹
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依托单位:
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批准号:07670356
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项目类别:Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
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资助金额:$0.77万
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财政年份:1995
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负责人:井上 直樹
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依托单位:
レーザー超音波ドプラー法による液体中の超音波速度と吸収の精密測定
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批准号:X00095----465014
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项目类别:Grant-in-Aid for General Scientific Research (D)
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资助金额:$0.29万
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财政年份:1979
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负责人:井上 直樹
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依托单位:
国内基金
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批准号:2026JJ50413
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