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病因不明皮膚疾患におけるヘルペスウイルス感染の役割の検討と新規ヘルペスウイルス検査法の開発

研究疱疹病毒感染在不明原因皮肤病中的作用并开发新的疱疹病毒检测方法

基本信息

批准号：
04F04590
负责人：
井上直樹
金额：
$ 0.38万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

1.病因不明皮膚疾患である天疱瘡とヒトヘルペスウイルス8(HHV-8)感染との関連について検討した。中国北東部地域の患者58例及び健常人230例についてELISA法によりHHV-8特異的抗体、PCR法により抹消血及び皮膚検体中のHHV-8ゲノムの存在を検討した。HHV-8特異抗体及びゲノムの陽性率は患者群で30%以上であるのに対し、健常群では8%以下でありHHV-8感染と有為な関連があることを見出した。2.発表されているもの及び研究室内で使われていたものなどいくつかのプライマーを比較検討し、単純ヘルペウイルス1型(HSV-1)、HSV-2、VZV、サイトメガロウイルス(CMV)、HHV-6、-7などのヘルペスウイルスDNAの検出を高感度で定量的に行えるリアルタイムPCR法を確立した。皮膚性脈管炎などの皮膚疾患患者より得た病理標本よりDNAを抽出しウイルスの検出・定量解析を進めた。3.ウイルス感染により発現される前初期蛋白により活性化されるプロモーターを用いて化学発光を指標として容易かつ迅速にVZV力価を測定できる細胞株を樹立した。この細胞株にVZVを感染させると24時間後にはすでにルシフェラーゼ活性を認め、時間経過とともに活性の増加をみた。発現されたルシフェラーゼ活性は感染させたVZV量に相関し、検出感度は50感染力価(PFU)と優れていた。CMV, HHV-6,HHV-7による感染ではルシフェラーゼ活性が増加しなかった。HSV-1では活性化がみられたが、感染48時間後には強い細胞変性効果を示すため、実用的にはVZVとの峻別に問題はない。

1. Skin disorders of unknown etiology: pemphigus, infection, and related diseases 58 patients and 230 healthy people from the north and east of China were examined for the presence of HHV-8 in serum and skin samples by ELISA and PCR. The positive rate of HHV-8 specific antibodies and antibodies was more than 30% in the patient group and less than 8% in the healthy group. 2. In the laboratory, we developed a method for comparative study of HSV-1, HSV-2, VZV, CMV, HHV-6 and-7 DNA detection, and established a highly sensitive and quantitative PCR method. Dermatological vasculitis is a disease of the skin. DNA is extracted and quantified. 3. The cell lines were established before the initial stage of infection, activation, and rapid determination of VZV force. The cell line was infected with VZV 24 hours later and the activity increased. It was found that the activity of the virus was correlated with the amount of VZV, and the susceptibility was 50 percent of the infectivity (PFU). CMV, HHV-6,HHV-7 infection is increasing in activity. HSV-1 is activated, infected 48 hours later, the cells are activated, and the VZV is activated 48 hours later.