抗ヘルペスウイルス剤耐性の迅速検索用細胞株の樹立と複製開始に特異的な阻害剤の創製

建立快速检测抗疱疹病毒耐药性的细胞系并创建复制起始的特异性抑制剂

• 批准号: 16017312
• 负责人: 井上 直樹
• 金额: $ 5.38万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16017312/
• 关键词: 水痘帯状疱疹ウイルス; 転写活性化; 点突然変異; 抗ウイルス剤; アシクロビル; 薬剤耐性; ヒトヘルペスウイルス; 水痘帯萢疹ウイルス; サイトメガロウイルス; 感染; リポーター細胞; DNA複製

水痘帯状疱疹ウイルス(VZV)ORF9プロモーターについて欠失変異を作製し、感染に伴う活性化に必要十分な最小プロモーター領域をORF開始点上流17-166の93塩基対に同定した。この領域内に転写活性化因子USFの結合配列が見出されたので、点突然変異を導入した結果、プロモーター活性の低下が見られた。VZVのORF28プロモーターでもUSF結合配列が重要であることが示されていることから、VZVの転写活性の中心的役割を果たすIE62蛋白とUSFの間に何らかの相互作用があることが推測される。なお、VZVのVZV ORF9プロモーター最小領域93bpをタンデムに結合すると活性が倍化した。ORF9の最小プロモーター領域をタンデムに結合したレポータープラスミドを利用してMeWo細胞よりVZVの感染力価を測定できる細胞株を樹立し、その感度と特異性を明らかにした。この細胞株を用いて、プラーク法を用いて報告されている感染初期過程に対する阻害剤の50%阻害濃度を現在より遥かに短い期間である2日間で測定できることを実証した。さらに、共培養の方法によりDNA複製阻害剤であるアシクロビル(ACV)の効果を検証した。細胞フリーウイルスの感染に比して、感染細胞を接種すると、ACVの阻害濃度が数倍高くなることが見られた。チミジンキナーゼ欠損によりACV耐性となったVZV株2株を例に、4倍程度の阻害濃度の差に基づき樹立した細胞株を用いて簡便に薬剤耐性株を同定できることを検証した。

Chickenpox virus (VZV)ORF9:17-166:93:17:16:17:1 In this field, the binding arrangement of the activation factor USF is found to be different, and the activity of the activation factor USF is reduced. VZV ORF28 is the most important binding site for USF, and the interaction between IE62 protein and USF is presumed. VZV ORF9 is the smallest domain 93bp. ORF9's minimal domain was determined by the infectivity assay using MeWo cells, and its sensitivity specificity was determined. The cell lines were tested using the medium and high concentration method. The 50% inhibitory concentration was measured during the initial infection period. In addition, co-culture methods are used to detect the effects of DNA replication inhibitors (ACV). Cell infection, inoculation of infected cells, and inhibition of ACV concentrations are several times higher. The difference in the concentration of ACV was 4 times higher than that of ACV.

项目成果

The impact of viral interferon regulatory factor-1 expression on responsiveness to interferon alpha and the production of infectious human herpesvirus 8 by BCBL-1 cells.

病毒干扰素调节因子 1 表达对干扰素 α 反应以及 BCBL-1 细胞产生传染性人类疱疹病毒 8 的影响。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Journal of Virology 78
• 作者: Mizutani T;Fukushi S;Saijo M;Kurane I;Morikawa S.;田口文広;Taguchi F;井上直樹;野澤直樹;Wang GQ;N.Inoue;V.Pozharskaya
• 通讯作者: V.Pozharskaya

CMVの先天性感染機構

CMV先天性感染机制

• 发表时间: 2006
• 期刊: 日本臨床 64・3
• 作者: Mizutani T;Fukushi S;Saijo M;Kurane I;Morikawa S.;田口文広;Taguchi F;井上直樹;野澤直樹
• 通讯作者: 野澤直樹

HCMVのゲノム構造と遺伝子機能

HCMV基因组结构和基因功能

• 发表时间: 2006
• 期刊: 日本臨床 64・3
• 作者: Mizutani T;Fukushi S;Saijo M;Kurane I;Morikawa S.;田口文広;Taguchi F;井上直樹
• 通讯作者: 井上直樹

Inhibition of infection and replication of human herpesvirus 8 by interferon-α and phosphonoformic acid in microvascular endothelial cells.

干扰素-α 和膦甲酸对微血管内皮细胞中人疱疹病毒 8 型的感染和复制的抑制作用。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Journal of Virology 78
• 作者: Mizutani T;Fukushi S;Saijo M;Kurane I;Morikawa S.;田口文広;Taguchi F;井上直樹;野澤直樹;Wang GQ;N.Inoue;V.Pozharskaya;L.T.Krug
• 通讯作者: L.T.Krug

Comparison of serologic responses between Kaposi's sarcoma-positive and -negative men who were seropositive for both human herpesvirus 8 and human immunodeficiency virus

• DOI: 10.1002/jmv.20167
• 发表时间: 2004-10-01
• 期刊: JOURNAL OF MEDICAL VIROLOGY
• 影响因子: 12.7
• 作者: Inoue, N;Spira, T;Luo, W
• 通讯作者: Luo, W