抗ヘルペスウイルス剤耐性の迅速検索用細胞株の樹立と複製開始に特異的な阻害剤の創製

建立快速检测抗疱疹病毒耐药性的细胞系并创建复制起始的特异性抑制剂

• 批准号: 16017312
• 负责人: 井上 直樹
• 金额: $ 5.38万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16017312/
• 关键词: 水痘帯状疱疹ウイルス; 転写活性化; 点突然変異; 抗ウイルス剤; アシクロビル; 薬剤耐性; ヒトヘルペスウイルス; 水痘帯萢疹ウイルス; サイトメガロウイルス; 感染; リポーター細胞; DNA複製

水痘帯状疱疹ウイルス(VZV)ORF9プロモーターについて欠失変異を作製し、感染に伴う活性化に必要十分な最小プロモーター領域をORF開始点上流17-166の93塩基対に同定した。この領域内に転写活性化因子USFの結合配列が見出されたので、点突然変異を導入した結果、プロモーター活性の低下が見られた。VZVのORF28プロモーターでもUSF結合配列が重要であることが示されていることから、VZVの転写活性の中心的役割を果たすIE62蛋白とUSFの間に何らかの相互作用があることが推測される。なお、VZVのVZV ORF9プロモーター最小領域93bpをタンデムに結合すると活性が倍化した。ORF9の最小プロモーター領域をタンデムに結合したレポータープラスミドを利用してMeWo細胞よりVZVの感染力価を測定できる細胞株を樹立し、その感度と特異性を明らかにした。この細胞株を用いて、プラーク法を用いて報告されている感染初期過程に対する阻害剤の50%阻害濃度を現在より遥かに短い期間である2日間で測定できることを実証した。さらに、共培養の方法によりDNA複製阻害剤であるアシクロビル(ACV)の効果を検証した。細胞フリーウイルスの感染に比して、感染細胞を接種すると、ACVの阻害濃度が数倍高くなることが見られた。チミジンキナーゼ欠損によりACV耐性となったVZV株2株を例に、4倍程度の阻害濃度の差に基づき樹立した細胞株を用いて簡便に薬剤耐性株を同定できることを検証した。

为Varicella-Zoster病毒（VZV）ORF9启动子进行了缺失突变，并在ORF起源的17-166碱基对处确定了必要的最小启动子区域，并且足以鉴定出与感染相关的激活。在该区域内发现了转录激活剂USF的结合序列，并且由于引入点突变，启动子活性降低。 USF结合序列也已显示在VZV的ORF28启动子中很重要，该启动子认为IE62蛋白之间存在某种相互作用，IE62蛋白在VZV转录活性和USF中起着核心作用。此外，VZV的VZV ORF9启动子与VZV的最小区域的结合增加了活性。使用记者质粒建立了能够测量MEWO细胞传染性滴度的细胞系，该质粒将ORF9的最小启动子区域与串联结合在一起，并揭示了其敏感性和特异性。使用该细胞系，我们证明了使用斑块方法报告的早期感染过程的50％抑制抑制剂可以在两天内测量，比现在要短得多。此外，通过共培养验证了Acyclovir（ACV）（ACV）的影响。与无细胞病毒感染相比，发现感染细胞的接种导致抑制浓度的ACV高几倍。使用两种VZV菌株，由于胸苷激酶缺乏而变得耐ACV，我们证实了使用基于抑制性浓度的差异约四倍的细胞系来轻松识别抗药性菌株。

项目成果

The impact of viral interferon regulatory factor-1 expression on responsiveness to interferon alpha and the production of infectious human herpesvirus 8 by BCBL-1 cells.

病毒干扰素调节因子 1 表达对干扰素 α 反应以及 BCBL-1 细胞产生传染性人类疱疹病毒 8 的影响。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Journal of Virology 78
• 作者: Mizutani T;Fukushi S;Saijo M;Kurane I;Morikawa S.;田口文広;Taguchi F;井上直樹;野澤直樹;Wang GQ;N.Inoue;V.Pozharskaya
• 通讯作者: V.Pozharskaya

CMVの先天性感染機構

CMV先天性感染机制

• 发表时间: 2006
• 期刊: 日本臨床 64・3
• 作者: Mizutani T;Fukushi S;Saijo M;Kurane I;Morikawa S.;田口文広;Taguchi F;井上直樹;野澤直樹
• 通讯作者: 野澤直樹

Inhibition of infection and replication of human herpesvirus 8 by interferon-α and phosphonoformic acid in microvascular endothelial cells.

干扰素-α 和膦甲酸对微血管内皮细胞中人疱疹病毒 8 型的感染和复制的抑制作用。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Journal of Virology 78
• 作者: Mizutani T;Fukushi S;Saijo M;Kurane I;Morikawa S.;田口文広;Taguchi F;井上直樹;野澤直樹;Wang GQ;N.Inoue;V.Pozharskaya;L.T.Krug
• 通讯作者: L.T.Krug

HCMVのゲノム構造と遺伝子機能

HCMV基因组结构和基因功能

• 发表时间: 2006
• 期刊: 日本臨床 64・3
• 作者: Mizutani T;Fukushi S;Saijo M;Kurane I;Morikawa S.;田口文広;Taguchi F;井上直樹
• 通讯作者: 井上直樹