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クローン病の増悪因子である胆汁酸の転写因子としての側面の解析

胆汁酸（克罗恩病的恶化因素）作为转录因子的分析

基本信息

批准号：
16659182
负责人：
大西真
金额：
$ 2.11万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659182/
关键词：
TNFα FXR RXR

项目摘要

TNFαのpromoter領域0〜-1000bpに対して、FXRおよびRXR発現plasmidを作製し、更にin vitro translationにより生成したFXRおよびRXR proteinを用いてDNA footprint法を施行したが、明らかなFXR結合部位を確認することはできなかった。マクロファージ細胞株を用いて、単独およびlipopolysaccharide存在下にてchenodeoxycolic acid添加によるTNFα mRNAの転写の変化を調べたが、いずれの場合においてもTNFα mRNAの転写増加が認められた。DNA footprint法では明らかなFXR結合部位は確認できなかったがTNFαのpromoter部の塩基配列の解読により-350bp近辺にFXR/RXRの結合配列であるIR-1と相補性の高い配列を認めたため、in vitro translationにより生成されたFXRおよびRXR proteinを用いて、この配列に対しelectrophoretic mobility shift assayを施行した。この配列に特異的なbandを認め、また抗FXR抗体によるsuper shiftを認め、この配列とFXR/RXRとの結合能が確認された。次に、TNFαのpromoter部を組み込んだluciferase plasmidを作製し、マクロファージ細胞株にtransfectさせ、luciferase reporter assayを施行した。chenodeoxycolic acid添加により活性の上昇を認めたが、FXR/RXR結合配列を含まないものでは活性の上昇は認められなかった。また、ursodeoxycholic acid添加では活性の上昇は認められず、FXR/RXRの活性化によりTNFαの転写が促進されることが示された。

TNFα promoter domain 0 ~-1000bp, FXR and RXR protein production plasmid production, and in vitro translation, FXR and RXR protein production by DNA footprint method to carry out, clearly identified FXR binding site The expression of TNFα mRNA was increased in the presence of chenodeoxycolic acid. DNA footprint method was used to identify the FXR binding site and to perform the electrophoretic mobility shift assay for the alignment of the promoter region of TNFα with the FXR/RXR binding site. The alignment of FXR/RXR was confirmed by a super shift in the alignment of FXR/RXR. The TNFα promoter component was used for the production of plasmid, and the plasmid reporter assay was performed. Chenodeoxycolic acid addition increases activity, FXR/RXR binding alignment increases activity The addition of ursodeoxycholic acid increased the activity of TNFα and increased the activity of FXR/RXR.