緑膿菌サイトトキシンの作用機序の解析-合成ペプチドを利用した機能領域の検討-

分析铜绿假单胞菌细胞毒素的作用机制 - 使用合成肽检查功能区域 -

• 批准号: 08770185
• 负责人: 大西 真
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770185/
• 关键词: 緑膿菌; サイトトキシン; 病原因子; 分子内会合; 小孔形成毒素

緑膿菌サイトトキシンの作用機序を解析するため、非活性型前駆体毒素(proCTX)とそのC末端領域(266-286,268-286)の合成ペプチド(C21,C19)およびC末端欠失活性型毒素(【.right filled triangle.】C20)を利用し解析を行った。C21は過剰量で【.right filled triangle.】C20の溶血活性を阻害(50%阻害;モル比=2000)したが、C19は過剰量(モル比=5000)においても【.right filled triangle.】C20の溶血活性を阻害しなかった。proCTXのC末端領域を分子外から提供しても【.right filled triangle.】C20の活性を抑制することから、proCTXの活性抑制は分子内C末端領域の効果であることを示唆するものと考えられた。【.right filled triangle.】C20は標的細胞膜上へ結合した後、SDS耐性の会合体を形成するが、proCTXはこの会合体形成能力が抑制されている。しかしながら、C21は【.right filled triangle.】C20の標的細胞膜結合を抑制していること、さらにproCTXの結合をも抑制していることが明らかとなった。以上のことから、合成ペプチドによる活性阻害効果はネイティブな分子内ペプチドの阻害効果とは異なる機序であると結論され、今回使用した実験系は機能領域の解析には有用ではないことが明らかとなった。一方、proCTXと【.right filled triangle.】C20の生化学的解析からproCTX,【.right filled triangle.】C20ともに小孔形成毒素の特徴を示すβシート優位の蛋白質であることがCDスペクトル解析により推測された。また、溶液中でproCTXは二量体で、【.right filled triangle.】C20は単量体で存在することが解析的ゲルろ過、化学架橋実験および解析超遠心機による沈降係数測定で明らかにした。この事実は二量体から単量体への変換が活性に重要であることを示唆するものであり、本毒素の活性基序解析に新たな視点を提供するものである。

The functional sequence of inactive protopotoxin (proCTX), inactive protopotoxin (proCTX), C-terminal domain (266-286268-286), C-terminal inactive toxin ([.right protoxins] C20) were analyzed. [.right filled triangle.] C20 hemolytic activity block [.right filled triangle.] C20 hemolytic activity block [.right hemolytic activity] C20 hemolytic activity block [.right hemolytic activity] C20 hemolytic activity block [.right hemolytic activity] C20 hemolytic activity block [.right hemolytic activity] C20 hemolytic activity block [.right hemolytic activity] C20 hemolytic activity block [.right hemolytic activity] C20 hemolytic activity blocks hemolytic activity The C-terminal domain of proCTX is extracellular. The activity of [.right filled triangle.] C20 is inhibited. The activity of proCTX is inhibited. The C-terminal domain of the molecule is suppressed. [.right filled triangle.] the confluence of SDS tolerant conjunctivium formed trophoblast and the ability of proCTX confluence formation inhibited the formation of conjunctiva in C20 cells. The cell membrane of C21, C21 [.right filled triangle.] C20 was used to inhibit the growth of tumor cells, and the membrane of C21 [.right filled triangle.] C20 was used to inhibit tumor growth. The above-mentioned and synthetic systems have been used to block the activity of the drugs. The intramolecular drugs have been used to block the damage. This time, we have used the mechanical field analysis method to analyze the useful information. One side, proCTX, [.right filled triangle.] C20, biochemical analysis, [.right filled triangle.] C20, keyhole formation of toxins, special display of β-phenotoxin, protein, CD, protein, protein. Two-dimensional volume of proCTX in solution, [.right filled triangle.] C20 volumetric volume exists in the determination of temperature, chemical frame, temperature, temperature, temperature and temperature. This toxin is used to measure the weight of the body, to measure the activity, to show that the activity is important, and to analyze the active motif of this toxin.