緑膿菌サイトトキシンの機能解析-C末端領域の影響について-

铜绿假单胞菌细胞毒素的功能分析-C末端区域的影响-

基本信息

  • 批准号:
    07770190
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.64万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
  • 财政年份:
    1995
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1995 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

緑膿菌サイトトキシン(286アミノ産残基)のC末端領域の機能を解析するために、前駆体毒素(pro)およびC末端から1、3、10、20、29、32アミノ残基を欠失する6種の変異毒素(C1,C3,C10,C20,C29,C32)を作成し、精製を行った。各精製標品はSDS-PAGE上で単一バンドとして認められた。各精製標品について以下の項目について解析し、結果を得た。1,ラット赤血球、ウサギ多形核球を標的細胞として用い、前駆体毒素およびC末端欠失変異毒素の活性を測定した。C1はproと同様細胞崩壊活性を示さず、C3、C10、C20と欠失が長くなるに従い活性が高まった。C29の活性はC20のそれと同様であった。しかしながら、C32の活性はC20およびC29の1/100以下に低下した。2,ラット赤血球上での毒素のオリゴマー形性能をウエスタン法で解析すると、溶血活性に相関するオリゴマー形成能が認められた。3,前駆体毒素はCDスペクトルの解析の結果βシート優位の蛋白であることが明かにされ、活性型毒素(C20)でも同様の結果を得た。活性化にともなう蛋白質の二次構造の明らかな変化は認められなかった。4,前駆体毒素およびC末端欠失変異毒素のトリプトファン蛍光スペクトル解析を行った。非活性型のpro、C1のスペクトルに比してC3-C29のスペクトルは、ピークが長波長に移行し蛍光強度の低下が認められた。これは、毒素分子内のトリプトファンの微小環境が活性と相関して変化していることを示すものである。
Analysis of the function of the C-terminal domain of Pseudomonas aeruginosa (286 residues), preparation and purification of six isotoxins (C1,C3,C10,C20,C29,C32) with missing residues at the C-terminal Each of the refined standards was identified on SDS-PAGE. The following items are analyzed for each refined standard, and the results are obtained. 1. To determine the activity of erythrocytes, erythrocytes, polymorphs, prototoxins and C-terminal allotoxins. C1, C10 and C20 showed high activity in the same cell line. The activity of C29 is similar to that of C20. However, the activity of C32 is below 1/100 of C20 and C29. 2, the toxin on the red blood cells of the form of the performance of the method to analyze, hemolytic activity related to the formation of the ability to recognize 3. The results of analysis of the precursor toxin CD and the active toxin (C20) were obtained. The secondary structure of activated protein is clearly identified. 4. The analysis of prototoxin and C-terminal isotoxin was carried out. Inactive pro, C1, C3-C29, C29, C3-C29, C29, C3-C29, C29-C29, C The microenvironment of the toxin molecule is closely related to the activity of the toxin.

项目成果

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    $ 0.64万
  • 项目类别:
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知道了