ハイパーサーミアによるヒストンH2AXのリン酸化機構の解明

阐明热疗组蛋白 H2AX 磷酸化机制

基本信息

批准号：
16659324
负责人：
高橋昭久
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Nara Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

γH2AXのフォーカス形成はDSBの数とも対応しており、これまでの生化学的な手法に比べて非常に高い感度で検出できることから注目されている。昨年度、我々は世界に先駆けて温熱によるγH2AXのフォーカス形成を明らかにし、温熱感受性と温熱誘導γH2AXフォーカス形成率との間に相関性を見出し、X線と同様に温熱でDSBが生成すること、温熱感受性の主要因はDSBであることを報告した[Cancer Res.,64(2004)8839-8845.]。温熱によるγH2AXのフォーカス形成については、国内外の数グループから学会報告されており、我々に続き、論文で報告された。しかし一般的に、温熱によるγH2AXフォーカス形成がDSBによるものではないと考える研究者が多い。その理由の一つとして、DSB認識タンパク質のMre11/Rad50/Nbs1が温熱処理後数時間の間、核外に出てしまうことがあげられる。しかし、温熱処理で核外に出たそれらのDSB認識タンパク質におけるその後の挙動やγH2AXとの関連など未解明なことが残っていた。そこで本年度は、温熱に対するDSB認識タンパクのNbs1およびMre11とγH2AXの局在を詳細に調べ、温熱による細胞応答を明らかにすることを目的とした。その結果、温熱処理後0.5時間後にはNbs1とMre11は核外に散在して見られたが、8時間後では既にフォーカス形成をしていたγH2AXと重なる形でNbs1とMre11共にフォーカス形成することが確認された。何故Nbs1とMre11のDSB認識タンパク質がX線と比べて遅れてDSB生成部位に集まってくるのかは分からないが、温熱によってDSBが誘導されていることが強く示唆された。上記の論点はCancer Res.,65,10633,2005にLett to Editorに記載した。

γH2AX的聚焦形成对应于DSB的数量，并且引起人们的注意，因为与以前的生化方法相比，它可以用很高的灵敏度检测到它。 Last year, we first discovered the focus formation of γH2AX due to heat, first in the world, and found a correlation between thermal sensitivity and thermally induced γH2AX focus formation rate, reporting that DSB is generated with heat, just like X-rays, and that DSB is the main factor in thermal sensitivity [Cancer Res., 64 (2004) 8839-8845.] The formation of focus of在国内和国际团体的几次会议上，已经报道了由于热量引起的γH2AX，然后是我们的论文。但是，许多研究人员通常认为，由于热量而导致的γH2AX聚焦形成不是由DSB引起的。原因之一是DSB认可的蛋白MRE11/RAD50/NBS1在热处理后几个小时留下了细胞核。但是，尚不清楚剩下的，例如这些DSB识别的蛋白的随后行为，这些蛋白在热处理期间暴露于核区域及其与γH2AX的关系。因此，今年我们旨在详细研究NBS1，MRE11和γH2AX，DSB识别的蛋白质的定位，并阐明由热量引起的细胞反应。结果，在热处理后0.5小时，看到NBS1和MRE11散布在细胞核外，但是在8个小时后证实，NBS1和MRE11都形成了与已经形成焦点的γH2AX重叠的焦点。目前尚不清楚为什么与X射线相比，DSB识别的NBS1和MRE11的蛋白质以延迟的方式聚集在DSB产生位置，但强烈建议通过热量诱导DSB。上述问题在cancer res。中描述了65,10633,2005在lett to Editor中。