マウスクローン胚における遺伝子リプログラミング最適化の試み

尝试优化小鼠克隆胚胎中的基因重编程

• 批准号: 16659454
• 负责人: 吉村 泰典
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659454/
• 关键词: マウス; クローン胚; リンカーヒストン; リプログラミング

体細胞型リンカーヒストンH1cの翻訳領域を含むベクターより翻訳領域を制限酵素によって切り出し、EGFP発現ベクターに組み替え、Tet-off誘導型のリンカーヒストン恒常発現細胞株を作成した。GV期およびMII期のマウス未受精卵を使用し、倒立位相差顕微鏡のマイクロマニピュレーターに装着したピエゾドライブインパクトマニュピュレーターにより、GV卵、MII卵の細胞質に様々な条件下でGFP-H1c発現3T3細胞の核を注入するための検討を行った。本年度の研究においては、ピエゾドライブインパクトマニュピュレータの至適条件の検討を行い、体細胞核の注入に最適化した注入圧、注入時間、ピエゾドライブ駆動時間、駆動振幅を決定する事が可能となった。さらに卵子内でのリンカーヒストン結合動態の検討を行った。未受精卵を使用し、GFP-H1c, GFP-H1oo発現ベクターをピエゾドライブマイクロマニュピュレータを使用してマイクロインジェクションした。その結果、卵子内での安定したGFP-H1c, GFP-H1ooの発現および卵子核への集積が認められた。今後、実際の卵子内での体細胞型および卵子特異的リンカーヒストンクロマチンへの動的結合動態を観察し、各卵子成熟過程および受精、体細胞核移植過程における各種リンカーヒストンの結合動態を明らかにする事が可能となった。本研究によって、マウスクローン胚における遺伝子リプログラミング最適化への端緒がついたものと考える。

The somatic type RNKA-KA- A study of nuclear injection of GFP-H1c 3T3 cells was carried out under the conditions of cytoplasmic analysis of GV and MII unfertilized eggs using inverted phase contrast microscopes This year's research is aimed at optimizing the injection pressure, injection time, injection time and oscillation amplitude of somatic cell nucleus. In addition to the dynamic discussion of the egg, the dynamic discussion of the egg is carried out. GFP-H1c, GFP-H1oo are used to detect sperm. GFP-H1c, GFP-H1oo and egg nucleus accumulation are recognized. In the future, we will investigate the binding dynamics of somatic cell types and ovum-specific changes in oocytes, and make it possible to understand the binding dynamics of various changes in the maturation process of oocytes, fertilization and somatic cell nuclear transfer. This study aims to optimize the quality of products and services.

项目成果

Chromatin remodeling with oocyte-specific linker histones

使用卵母细胞特异性连接组蛋白进行染色质重塑

• 发表时间: 2004
• 期刊: J Mamm Ova Res 21
• 作者: Tanaka M;Teranishi T;Yoshimura Y
• 通讯作者: Yoshimura Y