マウス体外成熟卵を使用した体細胞クローン胚由来ES細胞の樹立

利用小鼠体外成熟卵建立体细胞克隆胚胎来源的ES细胞

• 批准号: 23930015
• 负责人: 下地 彩乃
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: University of Yamanashi
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23930015/
• 关键词: ES細胞; 体外成熟; 体細胞核移植

核移植胚由来ES細胞(nuclear transfer-derived embryonic stem cell ; ntES cell)は、体細胞核移植技術を用いて、除核未受精卵に体細胞の核を顕微注入して作出したクローン胚から樹立するが、クローン胚の作出、及びntES細胞の樹立には多数の新鮮未受精卵を必要とする。そこで、本研究では、婦人科手術により摘出される卵巣や卵巣切片から採取可能な未成熟卵に着目し、未成熟卵の体外成熟(in vitro maturation ; IVM)を実施して成熟卵を作出し、SCNTに利用できる可能性、また、それを用いて作出した胚からntES細胞が樹立できる可能性を、マウスを実験モデルとして検討した。実験方法は、未排卵誘発のB6D2F1雌マウスの卵巣から未成熟卵(germinal vesicle ; GV)を採取し、IVMを行って成熟卵を作出した。体外成熟培養にはTaM培地にAA-2G、E-64、Astaxanthinを添加したmodified TaM(mTaM)培地、HSAPプレコートディッシュを用いた。作出した成熟卵の核を除核後、卵丘細胞をドナー体細胞核として体細胞核移植を実施しクローン胚を作出した。IVMクローン胚の桑実胚/胚盤胞への発生率は、in vivo成熟コントロール胚の約5分の1と低率ではあったが、胚盤胞へと発生可能であった。次に、胚盤胞からntES細胞の樹立に試みた。結果、前核形成195クローン胚から5系列のIVM ntES細胞株(IVM ntES1-5)を樹立した。樹立した細胞株について、未分化マーカー遺伝子の発現を確認したところ、すべての細胞株で発現が確認できた。さらに、これらの細胞株の多能性を検討するためキメラマウスの作出を試みた。その結果、3系列(IVM ntES1,2,4)から11匹のキメラマウスが得られた。さらに、得られたキメラマウスをICRマウスと交配させたところ、1系列(IVM ntES1)でgermline transmissionを確認することができた。本研究により、体外成熟卵を再生医療のためのSCNTのソースとして利用可能であることが実験モデルにおいて確認され、将来的にはヒトの再生医療においても、体外成熟卵を、ntES細胞を樹立するためのソースとして利用できる可能性が拓かれた。

Nuclear transfer-derived embryonic stem cell; ntES cell), somatic cell nuclear transfer technology is used, and the nucleus of unfertilized eggs is removed and the nuclei of somatic cells are micro-injected. The establishment of embryos, the production of embryos, and the establishment of ntES cells require the use of many fresh unfertilized eggs.そこで, this study is carried out, gynecological surgery is carried out, the eggs are removed, the eggs are sliced, and the immature eggs are collected, and the immature eggs are matured in vitro (in vitro maturation; IVM)を実师してMature eggを成し、SCNTにutilizationできるpossibility、また、それを用いてIt is possible to create embryonic ES cells and establish the possibility of doing so. The following methods are used to induce non-ovulation: B6D2F1 female ovulation, immature eggs (germinal vesicle; GV) are collected, and IVM is used to produce mature eggs. In vitro maturation culture TaM modified TaM (mTaM) AA-2G, E-64, Astaxanthin modified TaM (mTaM), HSAP TaM modified TaM. After the nuclei of mature eggs are removed and the nuclei of cumulus cells are removed, somatic cell nuclei are transferred and the embryos are made. IVM embryonic embryo/blastoderm cell embryogenesis rate, in The mature embryo of vivo is about 5 minutes long, the rate is low, and the blastoderm cells are likely to be born. Second, the blastoderm cells are established and the ES cells are established. As a result, the pronuclei were established and the 195-cube embryonic 5 series IVM ntES cell line (IVM ntES1-5) was established. Establishment of した cell line について, undifferentiated マーカー缝子の発appears and confirms したところ, すべてのcell line で発appears and confirms できた. The pluripotency of the さらに, これらの cell line has been tested. The results of その, 3 series (IVM ntES1, 2, 4) から11 のキメラマウスが got られた.さらに、得られたキメラマウスをICRマウスとMATINGさせたところ、1 series (IVM ntES1)でgermline transmissionをconfirmationすることができた. This study confirms that the possible utilization of in vitro matured egg regenerative medicine and SCNT's regenerative medicine will be confirmed. The possibilities of regenerative medicine, in vitro mature eggs, and ntES cells are established.

项目成果

マウス体外成熟卵を使用した体細胞クローン胚由来ES細胞の樹立

利用小鼠体外成熟卵建立体细胞克隆胚胎来源的ES细胞

• 发表时间: 2012
• 作者: Taira Y;Hayashida N;Yamashita S;Kudo T;Matsuda N;Takahashi J;Gutevitc A;Kazlovsky A;Takamura N;清水範彦;須藤美和子;石塚諭;石塚諭;清水由;広島大学附属東雲中学校;長岡樹;長岡樹;舩戸崇;関野智史;下地彩乃
• 通讯作者: 下地彩乃