転写因子NRSFの機能抑制マウスを用いた新規心臓イオンチャネルのクローニング

使用转录因子 NRSF 受到抑制的小鼠克隆新型心脏离子通道

• 批准号: 17659063
• 负责人: 鷹野 誠
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659063/
• 关键词: NRSF; channel; heart

心臓に存在するイオンチャネルのうち,胎児型イオンチャネルの発現制御にはNeuron Restrictive Silencing Factor(NRSF)という抑制性転写因子が重要な機能を果たしている。NRSF優性抑制変異体を発現するトランスジェニックマウス(dnNRSF Tg)の心室筋では,これらの胎児型心臓チャネルの発現量が顕著に増大している。我々はこのdnNRSF Tgマウス心室筋において,新たに(1)-70mV付近から活性化され,(2)一価の陽イオンにたいして非選択的な透過性を有し,(3)Ca拮抗剤によって抑制される電流を発見した。これらの性質は洞房結節ペースメーカー細胞にのみ存在する持続性内向き陽イオン電流(Ist)に酷似していた。Istは未だにその分子の実体が不明である。そこで次に我々はdnNRSF Tgマウス心室筋からIstをクローニングすることを試みた。まずNRSFが結合するRE-1という配列をもつ遺伝子をRE-1 data baseを用いて検索した。その結果,電位依存性Caチャネルα2サブユニット,同じくγ2サブユニット,α1Dサブユニット,low voltage activated Caチャネルα13-3が候補としてヒットした。そこでRT-PCRを用いてdnNRSF Tgマウス心室筋のcDNAからCaチャネルα2,γ2,α1Dサブユニット遺伝子のクローニングを行った。これらをHEK293細胞に発現させ,その生理学的性質をIstと比較した。その結果,電位依存性と薬理学的性質はIstに類似した電流を記録することができたが,イオン透過性は全く異なっており,Istとは別のイオン電流であると結論した。現在は継続してlow voltage activated Caチャネルα13-3の全長cDNAをクローニングすることを試みている。

Heart viscera に exist す る イ オ ン チ ャ ネ ル の う ち, tire type where イ オ ン チ ャ ネ ル の 発 now suppression に は Neuron Restrictive Silencing Factor (NRSF) と い う inhibitory planning function of important Factor が writing な を fruit た し て い る. NRSF optimal inhibition - variant を 発 now す る ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス dnNRSF (Tg) の ventricular muscle で は, こ れ ら の tire where a routine core チ ャ ネ ル の 発 now quantity が 顕 に raised large し て い る. I 々 は こ の dnNRSF Tg マ ウ ス ventricular muscle に お い て, new た に (1) - 70 mv paying nearly か ら activeness さ れ, (2) a 価 の Yang イ オ ン に た い し て non sentaku な permeability を し, (3) Ca antagonism tonic に よ っ て inhibit さ れ る current を 発 see し た. こ れ ら の nature は bridal chamber nodules ペ ー ス メ ー カ ー cells に の み exist す る hold 続 sex introverted き Yang イ オ ン current (Ist) に resembles し て い た. Ist だにそ not だにそ the physical form of the だにそ molecule is が unknown である. そ こ で に I 々 は dnNRSF Tg マ ウ ス ventricular muscle か ら Ist を ク ロ ー ニ ン グ す る こ と を try み た. ま ず NRSF が combining す る RE - 1 と い う match column を も つ posthumous son 伝 を RE - 1 data base を with い て 検 cable し た. そ の as a result, the potential dependency Ca チ ャ ネ ル alpha 2 サ ブ ユ ニ ッ ト, with じ く gamma 2 サ ブ ユ ニ ッ ト, alpha 1 d サ ブ ユ ニ ッ ト, low voltage activated Ca チ ャ ネ ル alpha 13-3 が alternate と し て ヒ ッ ト し た. そ こ で rt-pcr を with い て dnNRSF Tg マ ウ ス ventricular muscle の cDNA か ら Ca チ ャ ネ ル alpha 2, 2, gamma alpha 1 d サ ブ ユ ニ ッ ト posthumous son 伝 の ク ロ ー ニ ン グ を line っ た. <s:1> れらをHEK293 cells に exhibit させ,そ <s:1> physiological properties をIstと are relatively more た た. そ の as a result, the potential dependency と 薬 neo-confucianism of similar nature は Ist に し た current を record す る こ と が で き た が, イ オ ン permeability は く all different な っ て お り, Ist と は don't の イ オ ン current で あ る と conclusion し た. Now は 継 続 し て low voltage activated Ca チ ャ ネ ル alpha over 13-3 の cDNA を ク ロ ー ニ ン グ す る こ と を try み て い る.

项目成果

Prospective identification of cardiac progenitors by a novel single cell-based cardiomyocyte induction

• DOI: 10.1096/fj.04-3540fje
• 发表时间: 2005-07-01
• 期刊: FASEB JOURNAL
• 影响因子: 4.8
• 作者: Yamashita, JK;Takano, M;Nishikawa, SI
• 通讯作者: Nishikawa, SI

Pathophysiological significance of T-type Ca channel : transcriptional regulation of T-type Ca channel-regulation of CACNA1H by neuron-restrictive silencing factor

T型Ca通道的病理生理意义：T型Ca通道的转录调节-神经元限制性沉默因子对CACNA1H的调节

• 发表时间: 2005
• 期刊: J.Pharmacol.Sci. 99
• 作者: Kuwahara;K;Takano;M.
• 通讯作者: M.

High risk for bradyarrhythmic complications in patient with Brugada syndrome cuased by SCNA5A genes

SCNA5A 基因引起的 Brugada 综合征患者发生缓慢性心律失常并发症的风险较高

• 发表时间: 2005
• 期刊: J.Am.Coll.Cardiaol. 46
• 作者: Makiyama;T. et al.
• 通讯作者: T. et al.