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生細胞内オルガネラ膜上タンパク質の一分子可視化技術の開拓

活细胞细胞器膜蛋白单分子可视化技术的开发

基本信息

批准号：
17659076
负责人：
今泉祐治
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

全反射蛍光顕微鏡を利用して、生きた細胞内で機能している細胞内小器官、特に小胞体の膜上に存在する特定の蛋白質(特にはリアノジンCa^<2+>遊離チャネル)のリアルタイムでの機能を一分子可視化法により、解明することを試みた。さらにその技術を一般化し、その他の小胞体上の蛋白質、あるいはその他のオルガネラ(ミトコンドリアなど)の膜表面蛋白を一分子可視化し、その機能解析に新分野を切り開くための端緒とするべく検討した。(1)膜電位固定下で平滑筋細胞膜上の1分子のまたは凝集した分子群のCa^<2+>チャネルが脱分極で開口することにより、細胞膜直下の筋小胞体からのリアノジン受容体を介したCa^<2+>遊離を可視化することに成功した(07年日本薬理学会年会発表;論文投稿準備中)。(2)YFPでラベルされた2および3型リアノジン受容体をHEK293細胞に発現させ、リアノジン受容体開口による自発的Ca^<2+>遊離現象を一分子可視化することを試行している。(3)CFPラベルされた大コンダクタンスCa^<2+>活性化K^+チャネルをHEK293細胞に発現させ、機能的クラスター形成の過程を一分子可視化法により明らかにした。また(2)と同時に発現させることにより両分子の機能連関の可視化を検討している。

Total reflection microscopy is used to visualize the intracellular functions of specific proteins (especially Ca^<2+> free proteins) present in small intracellular organs and especially in the membrane of small cells. The techniques are generalized, proteins on other microsomes, molecular visualization of membrane surface proteins on other microsomes, functional analysis of membrane surface proteins on other microsomes, and functional analysis of membrane surface proteins. (1)Under membrane potential fixation, the aggregation of 1 molecule on smooth muscle cell membrane and Ca^<2+>-free interaction of molecular groups were successfully visualized.(Presented at the annual meeting of Japan Institute of Science, 2007; paper preparation) (2)YFP is a type 2 and type 3 receptor that occurs in HEK293 cells and is free from Ca^<2+> ions in the receptor opening. (3)CFP is a molecular visualization method for the development and functional formation of HEK293 cells. (2) The visualization of molecular functional relationships is discussed simultaneously.