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トリクロロエチレンによるヒトヘルペスウイルス6の再活性化の機序解明と予防対策

三氯乙烯重新激活人类疱疹病毒6型的机制及预防措施的阐明

基本信息

批准号：
17659175
负责人：
那須民江
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659175/
关键词：
トリクロロエチレン全身性皮膚・肝障害中国ヒトヘルペスウイルス6 再活性化メチル化メチル化特異的PCR ダイレクトシークエンスサイトカイン 6型ヒトヘルペスウイルス DNAメチル化 HHV6遺伝子型

项目摘要

これまでの研究において、トリクロロエチレン曝露により発生する全身性の皮膚-肝障害患者には抗体価の高いものが多いこと、これらの患者のHHV6遺伝子量が多いことが判明し、HHV6の再活性化が生じている可能性が示唆された。この再活性化はHHV6遺伝子の脱メチル化が原因であるとの仮説をたて、約1週間間隔で採血した入院患者の血液を用いてHHV6遺伝子のメチル化を検討した。患者から採血された血液のバフィーコートからDNAを抽出した。メチル化は「メチル化特異的PCR法」で解析した。しかし、HHV6のように発現量が極めて低い遺伝子は、バイサルファイト処理した際にDNAが壊れてしまい、従来のメチル化解析法ではメチル化の解析は不可能であることが判明した。そこで解析の方向性を少し変更した。ウイルスのDNAをbisulfate処理した後PCRで増幅し、HHV6のimmediate-early gene 1(1E1)と呼ばれる遺伝子(HHV6再活性化の際に最も早期に出現する蛋白)のプロモータ領域とその上流の繰り返し配列がみられるR3領域のCpG領域をdirect sequenceした。健常者から抽出できたHHV6DNAは70〜100%メチル化していたが、HHV6が活性化した状態(ポジティブコントロール)から抽出したHHV6 DNAのメチル化は0〜2%であった。即ち、活性化が見られたHHV6のDNAでは脱メチル化が誘発されており、先の仮説「HHV6の再活性化は脱メチル化によって起こる」可能性が示唆された。このdirect sequence法を用いて、今後再度患者のHHV6のメチル化状態を解析してゆきたい。

These studies indicate the possibility of HHV6 reactivation occurring in patients with systemic skin-liver disorders due to high levels of antibodies and high levels of HHV6 protein in these patients. This reactivation of HHV6 gene causes de-activation of HHV6 gene, and blood samples were collected from patients admitted to the hospital at intervals of about 1 week. Blood samples were collected from patients and DNA was extracted. Analysis of "PCR method specific to culture". The amount of DNA detected by HHV6 is extremely low. DNA analysis is impossible when it is processed. The analysis of the direction of the change. After bisulfate treatment, the PCR amplification of HHV6 DNA increased, and the direct sequence of HHV6 immediate-early gene 1(1E1) and CpG domain was detected. HHV 6 DNA is 70 ~ 100% active in healthy individuals and 0 ~ 2% active in HHV6 DNA. That is to say, the activation of HHV6 DNA has been observed, and the possibility of "reactivation of HHV6 DNA has been demonstrated." The direct sequence method is used to analyze the HHV6 status of future patients.