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フタル酸ジ-2-エチルヘキシルの毒性メカニズムの解明とメカニズムを基にしたリスクアセスメント

邻苯二甲酸二-2-乙基己酯毒性机制的阐明及基于该机制的风险评估

基本信息

批准号：
02F00531
负责人：
那須民江
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

フタル酸ジ-2-エチルヘキシル(DEHP)の毒性発現に種差があることは既に知られている。この種差の原因としてまず第一にDEHPの代謝の種差を見当した。その結果、リパーゼの活性の種差(キネティクスの種差)が大きく、マウスとマーモセットの間には150倍以上の差が認められた。今回はDEHPのダイナミクスの種差を明らかにするために、DEHPの代謝物のMEHPが配位するPPARαの標的遺伝であるミトコンドリアのmedium chain acylCoA dehydrogenase(MCAD)等とペルオキシゾームのperoxisomalthiolase(PT)等のDEHP投与による誘導を検討した。1.8週齢の雄CD-1マウスとSDラットを、コントロール群とDEHP2.5mmol/kgb.w.投与群に分け2週間経口投与した。3ヶ月齢の雄マーモセットは、コントロール、DEHP0.25,1.25,6.25mmol/kgb.w.投与群に分け、15ヶ月経口投与した。これらの動物を解剖後、肝臓を用いてRNA単離、Oligo(dT)_<12-18>プライマーでcDNA合成した。プライマーは、マウスMCAD GI6680617,ラットMCAD GI202688,マウスPT GI18700003,ラットPT GI6978428の塩基配列を参考に、またマーモセットに関してはマウスとヒトの配列の共通部分からmRNAの一部分の配列を読み取り作成した。2.マウス、ラットではMCADの誘導が見られたが、マーモセットでは1.25,6.25mmol/kgb.w.で減少傾向が見られた。これらの結果はウェスタンブロット法(蛋白の発現量)での結果と一致する傾向が見られた。3.PTはラットで最も強く誘導され、マウスでも誘導が見られたが、マーモセットでは1.25,6.25mmol/kgb.w.で減少傾向が見られた。しかしウェスタンブロット法で蛋白の発現をみると、PTの誘導はラットとマウスの間に大差なかった。DEHPのカイネティクスより、PPARα標的遺伝子発現の誘導はマウス>ラット>マーモセットであるとの仮説をたてて実験を行った。しかし、実際はこのような単純な仮説だけでは説明できず、DEHPのダイナミクスの種差にはカイネティクスの種差の関与もあるが、これだけでは説明できないダイナミクスの種差もみられることが判明した。

The toxicity of DEHP is different from that of DEHP. The reason for this difference is that the first difference in the metabolism of DEHP is obvious. The difference in activity between the two groups was more than 150 times. In this paper, DEHP metabolites such as MEHP and PPARα target molecules such as medium chain acylCoA dehydrogenase(MCAD) and peroxisomalthiolase(PT) were investigated. 1.8 CD-1 was administered at 2.5 mmol/kg b.w. and the dose was administered at 2 weeks. In March, the male,, and DEHP 0.25, 1.25, and 6.25mmol/kgb.w. were administered to the group, and in May, they were administered orally. After the animal was dissected, the liver was used for RNA isolation and Oligo(dT)<12-18>_DNA synthesis. MCAD GI6680617, MCAD GI202688, PT GI 1870003, PT GI6978428 are the common parts of mRNA alignment. 2. The induction of MCAD decreased by 1.25 mmol/kg b.w. The results of this method are consistent with those of the protein production method. 3. PT was most strongly induced and decreased by 1.25 and 6.25 mmol/kg b.w. There is a big difference between protein production and PT induction. DEHP gene expression and PPARα gene expression The difference between DEHP and the seed is not clear.