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トリクロロエチレンによる全身性皮膚-肝障害はHHV6の脱メチル化が原因である

三氯乙烯引起的全身皮肤-肝脏损伤是由 HHV6 去甲基化引起的

基本信息

批准号：
19659148
负责人：
那須民江
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究ではヒトヘルペスウイルス6型(HHV6)がトリクロロエチレンによる全身性の皮膚-肝障害患者においてしばしば再活性化することに着目して、本ウイルスの再活性化はウイルスゲノムの脱メチル化により起こるという仮説を立てた。ウイルスゲノムのメチル化の割合は再活性化に伴い最も早く発現すると考えられているIE1遺伝子のプロモーター領域及び、その上流の反復配列(R3領域)について調べた。患者の血液からウイルスゲノムを抽出し、DNA中のシトシンをウラシルに変換する反応を行った後、IE1とR3領域のみ増幅するプライマーを用いPCRを行い、その産物をsub-cloning後、シークエンスを行いメチル化の割合を確かめた。予備実験において、健常人(ウイルスのメチル化が想定される)及び培養したウイルス(脱メチル化が想定される)をサンプルとして測定の条件検討を行い、その後今回の測定目的であるトリクロロエチレンによる全身性の皮膚-肝障害患者40名のサンプルで測定を行った。IE1,R3両領域でbisulite処理後のPCR産物が得られるが、sub-cloning後sequenceすると、全てが別の遺伝子を増幅していることがわかった。bisulite処理をしているため、増幅しているものが何由来であるか判別不能であった。再度、某研究者より供与されたHHV6の潜在化、再活性化のモデルとなる3サンプルについてTaq、及びannealing温度の検討、nested PCR,touchdown PCR等を試みた。しかし、DNA中のシトシンをウラシルに変換する反応を行った後、IE1とR3領域のみ増幅するプライマーを用いPCR産物までは確認できるが、sub-cloning後sequenceしても目的のウイルスの塩基配列を検出できなかった。原因は最後まで判明しなかった。

This study is aimed at establishing the role of reactivation in patients with systemic skin-liver disorders due to HHV-6 (HHV-6), and the role of reactivation in systemic skin-liver disorders. It is necessary to reactivate the separation and reactivation of the first phase of the second phase of the first phase of the first phase of the first The patient's blood must be extracted, the DNA must be transformed, the IE1 and R3 domains must be amplified, the PCR must be performed, and the products must be sub-cloned. In this study, we investigated the conditions for the determination of 40 patients with systemic skin-liver disorders, including healthy individuals and cultured individuals. The PCR products after bisulfite treatment in IE1,R3 were amplified after subcloning, subcloning and total amplification. Bisulite processing is not easy to determine. Again, a researcher provided and tested the latent and reactivation of HHV6 by Taq, temperature and annealing, nested PCR and touchdown PCR. The PCR product was confirmed after the sequence of the DNA sequence was subcloned and the sequence of the DNA sequence was subcloned. The reason is finally determined.