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胆管前駆細胞の特性解析と胆管形成を伴う高次機能肝組織再構築に関する研究

胆管祖细胞的表征及伴随胆管形成的高功能肝组织重建研究

基本信息

批准号：
17659408
负责人：
猪飼伊和夫
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度までにThy1(+)細胞の中に存在するGP(+)細胞は胆管細胞特異的なマーカーCFTRを発現し、胆管前駆細胞である可能性が示唆されたことから、マウス胎仔肝より蛍光励起セルソーターを用いてThy1(+)GP(+)およびThy1(+)GP(-)細胞を分離し、RT-PCRおよび免疫染色にて遺伝子および蛋白発現を検討した。その結果、両細胞共にαSMA、desmin、vimentinの発現を認めたが、CFTR以外の胆管細胞特異的マーカーの明らかな発現を認めなかった。従って、Thy1(+)GP(+)細胞は胆管前駆細胞の可能性よりも、幼若な間葉系細胞と考えられた。一方、Thy1(+)GP(+)細胞を用いたin vitroにおける肝組織構築の検討を行う過程で行った共培養実験の結果、Thy1(+)GP(+)細胞はCD49f(+)肝前駆細胞のin vitroにおける成熟化を促進させる効果がある一方で、Thy1(+)GP(-)細胞は成熟化を抑制することが確認された。本年度は両細胞のさらに詳細な特性解析をマイクロアレイによる発現遺伝子の網羅的解析により検討したが、幼若な間葉系細胞であるということ以上に細胞種を同定するには至らなかった。一方、CD49f(+)肝前駆細胞にもGP(+)細胞とGP(-)細胞が存在することが明らかとなった。これまでの先行研究から胆管細胞と肝細胞は共通の幹・前駆細胞から発生すると考えられていることから、胆管前駆細胞の分離および肝細胞および胆管細胞を含む高次肝組織再構築を目指して、CD49f(+)肝前駆細胞分画中のGP(+)およびGP(-)細胞に着目し蛍光励起セルソーターを用いてそれぞれの細胞を分離採取し、現在その特性解析を進めている。

Last year, the possibility that GP(+) cells in Thy1 (+) cells could express bile duct cell-specific NAMAKA-CFTR and bile duct anterior lobe cells was raised. Therefore, we used this method to isolate Thy1 (+)GP(+) and Thy1 (+)GP(-) cells in the fetal liver, and examined the expression of genes and proteins by RT-PCR and immunostaining. As a result, the expression of αSMA, desmin and vimentin in bile duct cells other than CFTR is recognized. Thy1(+)GP(+) cells are the primary cells of bile duct. Results of co-culture of Thy1 (+)GP(+) cells in vitro during liver tissue architecture and maturation of Thy1 (+)GP (+) cells in vitro confirmed that Thy1 (+) GP(+) cells promoted maturation of CD49f (+) hepatic progenitor cells in vitro. This year, the analysis of the detailed characteristics of the cells was carried out. The analysis of the network of the cells was carried out. The cells of the young mesenchymal line were identified. CD49f (+) cells, GP(+) cells and GP(-) cells exist in the liver. This study was conducted in advance to investigate the development of common stem and progenitor cells in bile duct cells and hepatocytes, and the isolation of common stem and progenitor cells in bile duct cells and hepatocytes, including high-level liver tissue reconstruction. CD49f (+) and GP(-) cells in hepatic progenitor cells were isolated from common stem and progenitor cells. Now, the analysis of the characteristics of the company has been carried out.