血管内皮前駆細胞移植による脳毛細血管再生と遺伝子治療への応用

内皮祖细胞移植在脑毛细血管再生和基因治疗中的应用

• 批准号: 17659490
• 负责人: 竹内 昭憲
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659490/
• 关键词: 再生医学; 遺伝子; 脳神経; 前駆細胞; 内皮細胞; 脳; 血液脳関門; 再生医療; green fluorescent protein; Green mice; 脳毛細血管内皮細胞; 内皮細胞前駆細胞; 神経細胞障害

頭部外傷や脳血管障害による、血液脳関門の破綻や神経細胞障害に対する有効な治療法はいまだ確立されていない。本研究は、内皮細胞前駆細胞(endothelial progenitor cell: EPC)を使用し、破綻した脳血管の再生を試みようとするものである。さらに、内皮細胞として定着した前駆細胞に神経栄養因子遺伝子を導入しておくことにより、損傷した神経細胞への遺伝子治療を目指したい。これらの研究により、損傷により破綻した血管(血液脳関門)と神経細胞障害を同時に治療できる可能性がある。EPCのマーカーであるCD34を指標として、抗CD34抗体を吸着させたマグネットビーズを使用し、抗原抗体反応を利用して単離を行った。同方法により、マウスの血液からEPCを分離したところ、CD34陽性であることを確認した。単離の精度は向上し、比較的純度の高い細胞を得られるようになった。さらに、単離したEPCを脳内環境におくことで、脳毛細血管内皮細胞へ分化するかどうかを調査した。アストロサイト培養上清を収集し、その上清をEPC培養液中に添加し、Flk-1/KDRやTie-2/Tek、GLUT-1などの脳毛細血管内皮細胞のマーカーが発現の確認を試みた。しかしながら、十分な分化を認めなかったため、アストロサイトの培養上清の濃縮を行った。濃縮された上清をEPC培養液中に添加したが、やはり十分な分化が得られなかったため、現在更なる濃縮を試みている。

Head trauma や 脳 vascular handicap of に よ る, blood 脳 masato door の flaw や 経 cells handicap of god に す seaborne る have sharper な therapy は い ま だ establish さ れ て い な い. In this study, を and endothelial progenitor cells (EPC)を were regenerated using を and た脳 vascular <s:1> to try みようとする みようとする である である である. さ ら に, endothelial cells, と し て fixed on し た に 駆 cells before god 経 tech students.their ownship raise factor heritage 伝 son を import し て お く こ と に よ り, injury し た god 経 cells へ の heritage 伝 son treatment を refers し た い. こ れ ら の research に よ り, injury に よ り flaw し た blood vessels (blood 脳 masato door) と 経 cells handicap of god を に treatment at the same time で き る possibility が あ る. EPC の マ ー カ ー で あ る CD34 を index と し て, anti CD34 antibody を sorption さ せ た マ グ ネ ッ ト ビ ー ズ を use し, antigen antibody against 応 を using し て 単 line from を っ た. Method with に よ り, マ ウ ス の blood か ら EPC を separation し た と こ ろ, CD34 positive で あ る こ と を confirm し た. Youdaoplaceholder0 is more accurate than <s:1> and the purity is <s:1> higher than that of <s:1> cells を is られるようになった. さ ら に, 単 し た EPC を 脳 internal environment に お く こ と で, へ 脳 capillary endothelial cells differentiation す る か ど う か を survey し た. ア ス ト ロ サ イ ト culture supernatant を 収 し, そ の supernatant を EPC medium, add し に, Flk 1 / KDR や Tie - 2 / Tek, GLUT - 1 な ど の 脳 capillary endothelial cells の マ ー カ ー が 発 の confirm を now try み た. し か し な が ら, very な differentiation を め な か っ た た め, ア ス ト ロ サ イ ト の culture supernatant の enrichment を line っ た. Enrichment さ れ た supernatant を EPC medium, に add し た が, や は り very が な differentiation to ら れ な か っ た た め, now more な る enrichment を try み て い る.