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可溶性タンパク質を形質膜貫通タンパク質へ変換する新しい分子マシーナリーの開発

开发新的分子机制将可溶性蛋白质转化为血浆跨膜蛋白

基本信息

批准号：
18658138
负责人：
伊東信
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18658138/
关键词：
O-型糖鎖セラミダーゼ形質膜細胞内輸送糖タンパク質シグナルアンカー配列ムチンボックススフィンゴ脂質代謝酵素形質膜II型タンパク質中性セラミダーゼ O型糖鎖スフィンゴ脂質セラミドN-デアシラーゼ細胞内トラフィッキングスフィンゴミエリナーゼ

项目摘要

細菌および無脊椎動物由来の中性セラミダーゼは分泌タンパク質であるが、ヒトを含む脊椎動物の中性セラミダーゼは形質膜II型タンパク質(N-末端を細胞質内に有し、触媒部位およびC-末端を細胞外に持つ)である。それらの一次構造を比較した結果、脊椎動物由来の本酵素はN-末端のシグナル配列の直後にセリン、トレオニン、プロリンに富んだ領域(ムチンボックスと呼称)を持つが、細菌および無脊椎動物のセラミダーゼはその部位が欠失していることが明らかになった。その後の研究で、ムチンボックスにO-型糖鎖が付加されることが本酵素の形質膜II型への変換に必須であることが明らかになった。また、このムチンボックスおよびシグナル配列を可溶性のタンパク質のN-末端に付加すると可溶性タンパク質は膜結合型となることも明らかにした。この方法を利用して、様々なレクチンやスフィンゴ脂質代謝酵素を膜結合型に変換できることを示した。例えば、スフィンゴミエリナーゼを膜結合型にすると形質膜のスフィンゴミエリンを分解し、セラミド量が増大することを明らかにした。ムチンボックスが付加されとTGNから形質膜への小胞移行の途中でプロテアーゼの作用を受けにくくなり、そのため可溶性タンパク質にならずに形質膜II型タンパク質になるのではないかと予想し、そのプロテアーゼの同定を試みた。しかし、今回調べた既存のプロテアーゼ阻害剤をセラミダーゼを過剰発現したHEK293細胞の培地に加えてもb-セクレターゼを過剰発現させてもセラミダーゼの分泌に変化せず、ムチンボックスを切り離すセラミダーゼの同定には至らなかった。一方、付加された糖鎖の構造を推定するためにセラミダーゼのレクチンブロッティングを行ったところ、PNAレクチンで特異的に染色されることが明らかになり、Galbl-3GalNAcというコアI型の糖鎖を持つことが明らかになった。

Bacteria and invertebrate origin of the neutral type of plasma membrane type II (N-terminal, cytoplasmic, catalytic site, C-terminal, extracellular). The primary structure of the enzyme was compared with that of vertebrate origin, bacteria and invertebrate origin. The enzyme was isolated from the N-terminal region of the invertebrate genome, and the enzyme was isolated from the invertebrate genome. In the future, the enzyme must be transformed into O-type carbohydrate. The N-terminal part of the soluble protein is added to the soluble protein, and the membrane-bound part of the soluble protein is added to the soluble protein. The method uses the membrane binding enzyme as an indicator. For example, the membrane of the membrane is decomposed and the amount of the membrane is increased. In the process of cell migration, the soluble membrane of TGN is affected by the interaction of TGN and TGN. In addition, the HEK293 cells were cultured in the presence of a protective agent, which was present in the presence of a protective agent. The structure of a sugar lock is estimated to be the same as that of a sugar lock, Galbl-3 GalNAc, Galbl-3 Galbl-3 Galbl-