昆虫の吸血戦略:ムシの唾はどのように血管を拡げるか?

昆虫吸血攻略：昆虫唾液如何扩张血管？

• 批准号: 18659008
• 负责人: 宇野 公之
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659008/
• 关键词: 一酸化窒素; ニトロフォリン; ガス結合性; 共鳴ラマン分光; pH依存性

吸血昆虫の唾液中に含まれるヘムタンパク質ニトロフォリンが、pHに応じて血管拡張因子NOや炎症物質ヒスタミンを放出・結合する分子機構を解明するために本研究を行った。本研究課題を通して、近年注目を集めているガス分子NOの生理的役割に対する理解を深めるとともに、NOやヒスタミンといった生理的にきわめて興味深い分子をニトロフォリンが捕捉する分子機作を解明することで、これらの生体内濃度を制御できる医薬品の設計に関する重要な手がかりを得ることを目的とした。まず、酸性残基を中心としたニトロフォリンの変異体を作成し、ヒスタミンやNO結合性のpH挙動を調べることにより、これらの結合に関わるアミノ酸残基を特定した。ニトロフォリンに含まれるヘムの上方には4つの酸性残基(Asp30、Glu32、Asp34、Asp35)が密集しており、これら酸性残基がpH依存性に関与すると考えられる。紫外可視分光計を用い、ニトロフォリンの多重変異体をヒスタミンにて滴定した結果、いずれの変異体もpH依存性を示したが、変異体E32QのみpH挙動が異なった。この結果は、ヒスタミン結合のpH依存性にはヒスタミン自身のpKaが関与するとともに、Glu32のプロトン化が関わることを示している。同様にニトロフォリン変異体をNOにて滴定した結果、変異体D30NではpH依存性が消失した。この結果は、Asp30がpH依存性を決定づける残基であることを示している。共鳴ラマン法を用いて配位したNOに由来するFe-NO伸縮振動を観測したところ、pHによりその波数に変化はなかったことから、ヘムからはなれたこれらの残基がpH依存性の原因であることが示唆された。

This study was conducted to elucidate the molecular mechanisms of the secretion and binding of vasodilator NO in the saliva of blood-sucking insects. This research topic has been widely studied in recent years. It is important to understand the physiological function of NO and its molecular mechanism in order to control its concentration in vivo and to design medical products. The acid residues in the center of the protein are selected for the synthesis of the amino acid residues in the NO binding and pH regulation. The acidic residues (Asp30, Glu32, Asp34, Asp35) are concentrated in the upper part of the protein, and the acidic residues are pH dependent. UV Spectrometer: pH Dependence of Different Species The results show that the pH dependence of the protein binding is related to the pKa of the protein itself and the pKa of Glu32. The pH dependence of different species of D30N disappeared. Asp30 is a pH-dependent residue. The resonance method is used to determine the origin of Fe-NO stretching vibration.