薬物代謝酵素CYP2C9の酸化活性とSNPとの対応関係

药物代谢酶CYP2C9氧化活性与SNP的对应关系

• 批准号: 14657573
• 负责人: 宇野 公之
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657573/
• 关键词: シトクロムP450; 薬物代謝; 共鳴ラマン分光; 薬物結合

本研究では、薬物代謝に関わるタンパク質の中でも主要な位置にあるヒト由来CYP2C9を対象とし、SNP情報を基礎とする各種変異体の薬物結合性と薬物代謝活性の測定を通して、ゲノム情報に基づいたオーダーメード医療を可能にする分子論的指針を確立することを目的とした。まず、大腸菌による発現に至適化して試験管内全合成されたCYP2C9遺伝子を発現ベクターに組換え、CYP2C9タンパク質の大量発現系を構築した。代謝活性や分光学的測定に十分な量のCYP2C9を得ることができた。この標品を用い、薬物結合性と代謝活性の測定を行った。酸化型標品を薬物で滴定して吸収スペクトル変化を追跡することにより、薬物の結合親和性を決定した。薬物としては、ワルファリン、トルブタミド、アスピリン、インドメタシン、メフェニトイン等を用いた。難溶性薬物の結合性を広範かつ迅速に調べるため、微量透析法を用いて検討した。その結果、吸光度変化より求めた結合定数とほぼ一致する値を得ることができた。次いでCYP2C9の酸化型とCO結合型の共鳴ラマンスペクトルを測定した。その結果、酸化型では薬物の結合に伴って高スピンヘムが形成すること、薬物はCO近傍のヘムポケット内に結合することがわかった。また、グルコース6リン酸/グルコース6リン酸脱水素酵素/NADPH/シトクロムb5/CYP還元酵素/CYP2C9の系で薬物の水酸化反応を行い、生成物をHPLCにより定量した。その結果、本CYP2C9は十分な薬物代謝能を持つことを確認できた。

This study aims to establish molecular theoretical guidelines for determining the binding properties and metabolic activities of various heterochemicals based on CYP2C9 mapping and SNP information related to the metabolism of drugs. Construction of a large number of production systems for CYP2C9 gene production in vitro, in vitro and in vivo Metabolic activity and spectroscopic determination of CYP2C9 are very important. Determination of the binding activity and metabolic activity of these compounds Acidified standard substance titration, absorption, chemical tracing, determination of binding affinity The content of the article is in the following categories: content, category, etc. The binding properties of insoluble compounds are rapidly adjusted and investigated by microdialysis. The results, absorbance changes, the combination of fixed number and consistency, the value of which is obtained. CYP2C9 Acidification and CO Binding Resonance As a result, acid-type compounds are combined with high molecular weight compounds, and compounds are combined with high molecular weight compounds. Hydroacidification of compounds in the CYP2C9/NADPH/CYP5/CYP2C9 family was carried out and products were quantified by HPLC. The results showed that CYP2C9 was very effective in determining the metabolic energy of the compound.