胚性幹細胞との細胞融合及び遺伝子工学的手法で再プログラムされた心筋幹細胞株の樹立

胚胎干细胞融合及基因工程技术重编程心脏干细胞系的建立

• 批准号: 18659224
• 负责人: 王 英正
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659224/
• 关键词: 細胞融合; 体性幹細胞; 胚性幹細胞; 再プログラム; 心筋細胞再生; テロメア

増幅能が限られている体性幹細はテロメア関連伝子導入によって不死化する試みがされているが、遺伝子をベースにした方法では常に悪性腫瘍化する危険性が付きまとう。そこで、申請者らはES細胞との細胞融合によって、ES細胞が持つ極めて高い増殖性の性質を申請者らが単離に成功した心筋幹細胞に形質伝承する目的で、Cre-loxPシステムを利用したレトロウイルスベクターを作成した。ES細胞と融合によって形質変換した細胞の精製によって、心筋幹細胞クローンにCre-IRES-RFPレトロウイルスを感染させ、ウイルス感染が良好であることを確認した。(1)puro/hygroの抗生剤選択で純化したハイブリッド細胞が4倍体であることをFACSで確認した。融合した心筋細胞は免疫組織染色にて、心筋幹細胞には発現していないES細胞特異的な転写因子の提示を認め、細胞融合の効率がその後の解析に有効な頻度(約50%)で生じていることを検証した。(2)RNAを回収しマイクロアレイによる網羅的検索によって、未分化ES細胞特異的転写因子や細胞周期調節因子について網羅的検索を行ったところ、約6割の心筋幹細胞特異的遺伝子の発現減少とそれに伴うES細胞固有因子の増加を融合した新規細胞の遺伝子プロファイルにて確認した。このことは、細胞融合によって心筋幹細胞が完全に形質変換したことを直接証明するものではなく、細胞融合前の約6割の心筋幹細胞がES細胞との再プログラムによる修飾の影響を受けたことを強く示唆した。(3)neo耐性遺伝子を持つalpha-MHC-EGFPを導入したES細胞の形質を継承した再プログラムされた心筋幹細胞は、in vitroにて通常のES細胞に比べ、心筋細胞に分化する効率が約3倍向上したことをEGFPの発現頻度にて確認された。逆に融合した心筋幹細胞は正常のES細胞と比し、細胞増殖能が約半分に低下した。このことは、ES細胞の持つ多能性分化能を再プログラムする手法を用いて、遺伝子工学的に幹細胞の運命を制御したことを証明し、今後の虚血心への融合細胞移植実験にて、生体内での心筋細胞再生医療への有用性について研究を発展させていく予定である。

Rights can picture が limit ら れ て い る body stem sex は テ ロ メ ア masato even 伝 son import に よ っ て die change す る try み が さ れ て い る が, but 伝 を ベ ー ス に し た method で は often に 悪 sex is swollen sores change す る dangerous 険 sex が pay き ま と う. そ こ で, applicants ら は ES cells と の cell fusion に よ っ て, ES cells が つ extremely め て い raised high yield on sexual nature の を applicants ら が 単 from に successful し た heart muscle stem cells に character 伝 bearing す る purpose で, Cre - loxP シ ス テ ム を using し た レ ト ロ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を made し た. ES cell fusion と に よ っ て form quality variations in し た cells の refined に よ っ て, heart muscle stem cells ク ロ ー ン に Cre - IRES - RFP レ ト ロ ウ イ ル ス を infection さ せ, ウ イ ル ス infection が good で あ る こ と を confirm し た. (1) puro/hygro の antibiotic tonic sentaku で purification し た ハ イ ブ リ ッ ド cell 4 times が で あ る こ と を both FACS で confirm し た. Fusion し た heart muscle cells は immunohistochemical staining に て, heart muscle stem cells に は 発 now し て い な い ES cell specific な planning write factor の prompt を confess め, cell fusion の sharper rate が そ の の after parsing に have sharper な frequency (about 50%) born で じ て い る こ と を 検 card し た. (2) RNA を back 収 し マ イ ク ロ ア レ イ に よ る snare 検 somalia に よ っ て, undifferentiated ES cells specific planning write factor や cell cycle regulation factor に つ い 検 somalia's line を っ て a net た と こ ろ cut の heart muscle stem cells, about six specific heritage 伝 son の 発 now reduce と そ れ に with inherent factor の raised plus を う ES cell fusion し た new rules cells の 伝 son Youdaoplaceholder0 プロファ にて にて にて にて confirm た. こ の こ と は, cell fusion に よ っ て が completely に heart muscle stem cells form quality variations in し た こ と を directly prove す る も の で は な く, cell fusion の before 6 cut の heart muscle stem cells が ES と の again プ ロ グ ラ ム に よ る modified の を by け た こ と を く and shown strong sucking し た. (3) neo patience heritage 伝 son を hold つ alpha - MHC - EGFP を import し た ES cells の character を 継 bearing し た again プ ロ グ ラ ム さ れ た は, in heart muscle stem cells Vitro に て の ES cells usually に than べ, heart muscle cells に す る が about 3 times sharper rate upward し た こ と を EGFP の 発 now frequency に て confirm さ れ た. Reverse に fusion of <s:1> た cardiac tendon stem cells <s:1> normal <s:1> ES cells と is about half a fraction lower than the が and に of the cell proliferation capacity に た た. こ の こ と は, ES cells の つ pluripotent differentiation can again を プ ロ グ ラ ム す る gimmick を with い て に stem cells, but 伝 engineering の luck を suppression し た こ と を し, future の virtual heart blood へ の be fused cells transplantation 験 に て, born in vivo で の heart muscle cell regeneration medical へ の usefulness に つ い て research を 発 exhibition さ せ て い く designated で あ る.

项目成果

Clonally amplified cardiac stem cells are regulated by Sca-1 signaling for efficient cardiovascular regeneration

• DOI: 10.1242/jcs.006122
• 发表时间: 2007-05-15
• 期刊: JOURNAL OF CELL SCIENCE
• 影响因子: 4
• 作者: Tateishi, Kento;Ashihara, Eishi;Oh, Hidemasa
• 通讯作者: Oh, Hidemasa

心不全

心脏衰竭

• 发表时间: 2005
• 期刊: 薬局 56
• 作者: 秋野正敏;筒井裕之
• 通讯作者: 筒井裕之

循環器科

心脏病学

• 发表时间: 2006
• 作者: 安藤譲二;曽我部隆影;山本稀美子
• 通讯作者: 山本稀美子

Skeletal myosphere-derived progenitor cell transplantation promotes neovascularization in deltasarcoglycan knockdowncardiomyopathy

骨骼肌球来源的祖细胞移植促进δ肌聚糖敲低心肌病的新生血管形成

• 发表时间: 2007
• 期刊: Biochem Biophys Res Commun 352
• 作者: Nomura T;Matsubara H.Oh H(他5人、7番目著者)
• 通讯作者: Matsubara H.Oh H(他5人、7番目著者)

医学の歩み

医学史

• 发表时间: 2014
• 作者: 高井敏朗;上條清嗣
• 通讯作者: 上條清嗣