心筋幹細胞移植医療の実現化に向けたヒト心筋幹細胞特異的増幅因子のクローニング

克隆人心肌干细胞特异性放大因子，实现心肌干细胞移植医学

• 批准号: 17659233
• 负责人: 王 英正
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659233/
• 关键词: 心筋前駆細胞; クローン化; Sca-1; 心筋細胞分化; 心筋細胞再生

平成17年7月1日より、心筋幹細胞移植医療の実現化に向けたヒト心筋幹細胞特異的増殖因子のクローニングに関する研究課題に関し、特にsignal sequence trap法を使ったadult由来心筋幹細胞の増殖因子の同定に関する研究を開始した。採取したadult由来マウス心筋幹細胞からのcDNA library作製し、レトロウイルスパッケージング細胞であるPlatE細胞にRoche社のFuGENE6を使用して導入し、レトロウイルスとして回収した。回収したレトロウイルスを感染効率が20%弱になるように調整してBa/F3細胞に感染させ、96well plateに10000個/wellで撒き、IL-3非存在下で2週間程培養した。培養により、シグナル配列を持たないpMX-SSTが感染したBa/F3細胞は死滅し、シグナル配列を持ったcDNA断片を融合したpMX-SSTが感染したBa/F3細胞のみ増殖が認められ、最終的に200近くの細胞クローンが認められた。これらの細胞クローンから染色体DNAを抽出した後、vector primerを用いてPCRを行い、挿入cDNA断片を回収した。回収したcDNA断片のすべてに対してシーケンサーによる解読を行い、NCBI BLASTホームページ上のnucleotide-nucleotide blastを使って相同性検索を行ったところ、adult由来マウス心筋幹細胞に特異的に発現している分泌タンパク質が2つ認められた。この2つは、RT-PCRでもmRNA発現が亢進していることを確認し、そのうちの1つは免疫染色でsphereを形成している細胞上に強くタンパク発現していることも確認した。現在、これらの同定されたタンパク質についてrecombinantによる薬物的刺激実験とノックアウトマウスを使った抑制実験の2つの方向から、同定されたタンパク質のマウス心筋幹細胞への増殖に対する効果を解析すべく準備を進めている。今後、同定されたタンパク質が増殖に関わることが明らかになれば、ヒト心筋幹細胞への応用が可能かどうか検討していく予定である。

On July 1, 2017, the research project on the development of cardiac stem cell-specific growth factors related to the development of cardiac stem cell transplantation therapy was started, especially the signal sequence trap method for the development of cardiac stem cell-derived growth factors related to the development of cardiac stem cells. The cDNA library of adult stem cells was used to construct and re-construct the cDNA library of adult stem cells. The infection rate of Ba/F3 cells was 20% in the presence of IL-3 and 10000 cells/well in the absence of IL-3. Culture and alignment of pMX-SST infected Ba/F3 cells and cDNA fragments fused with pMX-SST infected Ba/F3 cells and finally 200 near Ba/F3 cells. The DNA fragments were extracted from the cells, and the vector primers were used to detect the DNA fragments. The cDNA fragments were isolated from the stem cells, and the nucleotide-nucleotide blast on the NCBI BLAST gene was used to detect the identity of the cDNA fragments. This is confirmed by the fact that RT-PCR and mRNA expression are enhanced, and immunostaining and the formation of a sphere on the cells are confirmed by the fact that strong kutan ku expression is formed. Now, the same time, the same time. In the future, the same determination will be made regarding the proliferation of cardiac stem cells.

项目成果

移植細胞ツールとしての心臓由来心筋幹細胞

心脏来源的心肌干细胞作为移植细胞工具

• 发表时间: 2005
• 期刊: Pharma Medica 23(10)
• 作者: Namiki S;Kanai T;Watanabe M;et al.;王 英正
• 通讯作者: 王 英正

心血管領域での再生医療の現状と展望

再生医学在心血管领域的现状与展望

• 发表时间: 2005
• 期刊: 血管 28(3)
• 作者: 王 英正;立石健人;野村哲矢;松原弘明
• 通讯作者: 松原弘明

心不全と再生医療

心力衰竭和再生医学

• 发表时间: 2005
• 期刊: Heart View 9(2)
• 作者: 王 英正;高橋知三郎;松原弘明
• 通讯作者: 松原弘明

心臓組織由来幹細胞研究の現状

心脏组织源性干细胞研究现状

• 发表时间: 2005
• 期刊: 心臓 37(12)
• 作者: Namiki S;Kanai T;Watanabe M;et al.;王 英正;王 英正
• 通讯作者: 王 英正

心筋前駆細胞の発見による重症心不全への新たな細胞移植療法の到来

通过发现心脏祖细胞，治疗严重心力衰竭的新细胞移植疗法问世

• 发表时间: 2005
• 期刊: 臨床病理 53(1)
• 作者: 王 英正;立石健人;野村哲矢;松原弘明;王 英正
• 通讯作者: 王 英正