新規抗うつ薬結合蛋白質過剰発現マウスのストレス耐性とうつ病モデル動物の検討

过表达新型抗抑郁结合蛋白小鼠的应激耐受性检查和抑郁模型动物

基本信息

批准号：
18659338
负责人：
朝倉幹雄
金额：
$ 2.05万
依托单位：
St.Marianna University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

プロテオミクス的手法を用い抗うつ薬結合蛋白質を同定することを目的とする。昨年までSSRIであるミルナシプラン結合蛋白質を同定することを目的に、アミド基に結合するアフィニティーカラムを作成し、ラット大脳のホモジェナイズしたサンプルを添加し、ミルナシプランに蛋白質を結合させた。アフィニティーカラムに結合させた結合蛋白質を高濃度のミルナシプランを添加し、分離抽出した結合蛋白質をCy3蛍光標識した。抗うつ薬を結合させていない対照のアフィニティーカラムからの抽出蛋白質をCy5で蛍光標識し、両サンプルを混合後、一枚の二次元電気泳動ゲルを施行した。蛋白質の解析には、2D解析システム・バリアブル・イメージアラナイザーを用い解析し、Cy3、Cy5の蛍光波長の差からレーザーの波長を変えて測定することで各蛋白質のスポットごとの定量差を比較し、さらに質量分析を行った。この方法で、現在抗うつ薬結合蛋白質を十数個同定した。このプロテオミクス手法を用いて同定した抗うつ薬結合蛋白質の一つが、dynamin-1であることを突きとめた。Dynamin Iは脳にのみ存在している。また、プレシナプスでの神経伝達物質分泌に関与している重要な蛋白質であることが、近年の研究で証明された。Dynamin Iは開口分泌時のカルシウムのセンサーの働きをしている。dynamin-1はGTPaseであるので、GTPase活性を測定することで、薬物がdynamin-1の機能に関与するかを検討し、Sertraline,fluvoxamineなどがdynamin-1のGTPase活性を著名に減少させたことを報告した。

目的是使用蛋白质组学技术鉴定抗抑郁剂结合蛋白。直到去年，为了鉴定SSRI，MILNACIPRAN结合蛋白，SSRI，SSRI，一个与酰胺组结合的亲和力柱的结合，并加入了大鼠脑的均质样品，并与Milnacipran结合。将高浓度的Milnacipran添加到与亲和力柱结合的结合蛋白中，分离和提取的结合蛋白被荧光标记为Cy3。从没有抗抑郁药的对照亲和力柱中提取的蛋白质用CY5荧光标记，在混合两个样品后，进行了单个2D电泳凝胶。为了蛋白质分析，使用2D分析系统可变图像芳烃进行分析，并通过更改激光的波长来测量CY3和CY5的荧光波长，比较每个蛋白质点之间的定量差异，并进行质量分析。现在，该方法已经确定了十几种抗抑郁剂结合蛋白。我们已经确定Dynamin-1是使用此蛋白质组学技术鉴定的抗抑郁剂结合蛋白之一。 Dynamin I仅在大脑中存在。此外，最近的研究证明，它是突触前神经递质分泌的重要蛋白质。 Dynamin I在开放分泌过程中充当钙传感器。由于Dynamin-1是GTPase，因此我们通过测量GTPase活性研究了药物是否参与了Dynamin-1的功能，并报道舍曲林，氟氟众胺和其他人显着降低了Dynamin-1的GTPase活性。