C型肝細胞癌悪性化に関わる膜脂質変換酵素DGKθの研究

膜脂转换酶DGKθ参与C型肝细胞癌恶性进展的研究

• 批准号: 18659386
• 负责人: 武冨 紹信
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659386/
• 关键词: 肝臓外科学; ジアシルグリセロールキナーゼ; C型肝炎; 肝細胞癌; C型肝炎ウイルス

(1)肝細胞癌切除症例における免疫組織学的および分子生物学的検討:「HCVを原因とする肝発癌過程にDGKθはPI3キナーゼおよびPKC等のシグナル伝達因子を制御する事により関与している」という仮説を証明するため、まず、臨床的にDGKθ発現と肝細胞癌との関連性を確認するため、肝細胞癌切除症例を対象にRT-PCR法(19例)および抗DGKθ抗体を用いた免疫組織染色(58(H18年度)→112例(H19年度))を行った。(1)非癌部及び癌部組織から抽出したtotal RNAを使用してRT-PCRを行ったところ、12例(63%)の症例で癌部においてDGKθmRNAの発現が低下していた。(2)免疫組織学的検討では50%以上の肝癌細胞にDGKθ発現が認められる高発現群(n=33)と50%未満の肝癌細胞にしか発現を認めない低発現群(n=79)の2群にわけ検討したところ、年令・性別・肝炎ウイルスタイプ・肝機能・手術侵襲・腫瘍径などに関しては2群間に差を認めなかった。組織学的には高発現群における高・中分化が85%であったのに対し、低発現群では59%と組織学的分化度が低下する事が明らかとなった(p<0.05)。なお、生存率及び無再発生存率には両群間に有意差を認めなかった。肝癌組織分化度の低下とともにDGKθの発現が亢進していたことから、肝癌細胞の脱分化にDGKθ発現が関与している可能性が示唆された。(2)DGKθとHCV-NS5Aタンパク質およびPI3キナーゼの結合能の検討:DGKθとHCV-NS5AおよびPI3キナーゼp85αとの結合およびその結合部位を検討するため、機能ドメイン毎のDGKθおよびcystein-rich領域に変異を挿入したGFP融合DGKθ発現ベクターを作成した。さらに、DGKθ遺伝子配列よりsiRNA標的部位をコンピュータにて検討した。今後これらを使用し、肝癌細胞におけるDGKθの機能解析を進めていく予定である。

(1)Immunohistologic and molecular biological studies of hepatocellular carcinoma resection cases: "HCV causes and liver carcinogenesis, DGK theta, PI3, PKC and other factors related to the regulation of expression factors," and "demonstration," clinical, DGK theta development and hepatocellular carcinoma association confirmation,"hepatocellular carcinoma resection cases for RT-PCR (19 cases) and anti-DGK theta antibody immunostaining (58(H18)→112 (H19) cases). (1)Total RNA was extracted from non-cancerous and cancerous tissues, and the expression of DGKθmRNA was decreased in 12 cases (63%). (2)Immunohistologic examination revealed that more than 50% of HCC cells were identified with DGKθ high (n=33) and 50% of HCC cells were identified with DGK θ low (n=79). Histologically, 85% of the high and middle differentiation groups were high and 59% of the low differentiation groups were low (p<0.05). The survival rate and the survival rate without recurrence are different among groups. The possibility of DGK θ expression in hepatocellular carcinoma cells was also discussed. (2) The binding energy model of DGKθ and HCV-NS5A: HCV-NS 5A and PI3: The binding energy model of DGKθ and HCV-NS5A: PI3: p85α: GFP fusion DGKθ was established. DGK theta gene alignment, siRNA target sites, and gene expression patterns In the future, the function analysis of DGKθ in liver cancer cells will be further determined.