精子における遺伝子機能解析と新しい不妊診断・治療法への臨床応用

精子基因功能分析及不孕症诊疗新方法的临床应用

• 批准号: 18659478
• 负责人: 郡 健二郎
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659478/
• 关键词: マイクロアレイ; 精子; mRNA; 不妊治療; 遺伝子導入; 人工授精

既存のデータベースから得られるマウスのexpressed sequence tag(EST)をマイクロアレイ作製のためのスポット用DNAとして利用するほか、男性不妊に関与するとされる遺伝子群に特異的なプライマーセットを準備し、ゲノムDNAもしくは、mRNAから合成したcDNAを鋳型としてPCR増幅した断片をスポット用DNAとして使用した。7〜8週齢ICR系の雄マウスの精巣上体から精子を採取し不連続な濃度勾配を設けたパーコール液を通しての遠心分離、またはswim up法により運動精子のみを分離した。体細胞の混入を避けるため、0.5%Triton X-100で得られた精子を洗浄しておいた。得られた精子からTotal RNAを抽出した後、オリゴ(dT)を付加した担体を用いてポリA構造を持つmRNAを分離し、ゲノムDNAの混入を避けるため、RNase-freeのDNaseで処理しておき、これを鋳型としたRT-PCRによりcDNAを作成し蛍光色素で標識しておいた。得られたcDNAをガラスのフィルター上に貼り付けられたプローブとハイブリダイズさせ、蛍光のマイクロアレイ用スキャナーを用いて、マイクロアレイ上の蛍光量を測定する。精子mRNAをマイクロアレイで解析する本法の有用性を確かめるために、実際の精巣での遺伝子発現と精子に存在するmRNAとの比較・検討を行った。精子を採取したマウスの精巣組織から同様にmRNAを抽出し、マイクロアレイ法により遺伝子発現プロファイルを得たところ、精子mRNAの解析から得られた結果とほぼ一致した。続いて不妊モデルマウスから得られた精子を用いて同様にマイクロアレイを行い遺伝子発現プロファイルを得て、マウス精巣のcDNAライブラリとの間で発現パターンを比較したところ1000を超える遺伝子が発現の増強または減弱を示した。現在、これらの結果を解析中である。

Existing <s:1> デ タベ タベ ス ス ら ら られる ウス ウス <s:1> expressed sequence Tag (EST) を マ イ ク ロ ア レ イ cropping の た め の ス ポ ッ ト use DNA と し て using す る ほ か, men don't stretch marks に masato and す る と さ れ る heritage 伝 subgroup に specific な プ ラ イ マ ー セ ッ ト を し, ゲ ノ ム DNA も し く は, mRNA か ら synthetic し た cDNA を type where と し て PCR rights of し た fragment を ス ポ ッ ト Using DNAと て て use た. 7 ~ 8 weeks 齢 male ICR is の マ ウ ス の fine 巣 upper か ら sperm を take し not even 続 な concentration hook set match を け た パ ー コ ー を ル fluid flux し て の telecentric separation, ま た は swim up method に よ り movement sperm の み を separation し た. Somatic cells are mixed with を to avoid けるため, 0.5%Triton X-100で to obtain られた sperm を to wash off てお てお た た. Get られた sperm ら らTotal , after RNA を spare し た オ リ ゴ (dT) を plus し た supporter を with い て ポ リ A tectonic を hold つ mRNA を separation し, ゲ ノ ム の DNA mixed with を avoid け る た め, RNase - free の DNase で 処 Richard し て お き, こ れ を type where と し た rt-pcr に よ り cDNA を made し 蛍 photopigment で logo し て お Youdaoplaceholder0 た. Have ら れ た cDNA を ガ ラ ス の フ ィ ル タ ー に posted on pay け り ら れ た プ ロ ー ブ と ハ イ ブ リ ダ イ ズ さ せ 蛍 light の マ イ ク ロ ア レ イ with ス キ ャ ナ ー を with い て, マ イ ク ロ ア レ イ on の 蛍 light を determination す る. Sperm mRNA を マ イ ク ロ ア レ イ で parsing す る provisions の usefulness を か indeed め る た め に, essence of the event be の 巣 で の posthumous son 伝 発 と sperm に extant す る mRNA と の comparison, 検 line for を っ た. Sperm を take し た マ ウ ス の fine 巣 organization か ら with others に mRNA を spare し, マ イ ク ロ ア レ イ method に よ り posthumous son 伝 発 now プ ロ フ ァ イ ル を have た と こ ろ, sperm mRNA の parsing か ら must ら れ た results と ほ ぼ consistent し た. 続 い て don't stretch marks モ デ ル マ ウ ス か ら have ら れ た sperm を with い て with others に マ イ ク ロ ア レ イ を line い posthumous son 伝 発 now プ ロ フ ァ イ ル を て, マ ウ ス fine 巣 の cDNA ラ イ ブ ラ リ と の between で 発 now パ タ ー ン を compare し た と こ ろ 1000 を え る posthumous son 伝 が 発 is の raised strong ま た は abate を shown し た. Now, in the を parsing of the result, れら れら.

项目成果

Complete response of a recurrent advanced urachal carcinoma treated by S-1/cisplatin combination chemotherapy

• DOI: 10.1111/j.1442-2042.2006.01487.x
• 发表时间: 2006-08-01
• 期刊: INTERNATIONAL JOURNAL OF UROLOGY
• 影响因子: 2.6
• 作者: Kojima, Yoshiyuki;Yamada, Yasuyuki;Kohri, Kenjiro
• 通讯作者: Kohri, Kenjiro

男子不妊症に対する遺伝子治療を目指した精巣内遺伝子導入に関する基礎的研究

睾丸内基因转移用于男性不育基因治疗的基础研究

• 发表时间: 2007
• 作者: 小島祥敬、佐々木昌一、郡健二郎;ほか
• 通讯作者: ほか

Assessment of serum follicle-stiumlatmg hormone level and testicular volume for prediction of paternity potential in pubertal boys who underwent bilateral orchiopexy in childhood.

评估血清卵泡刺激激素水平和睾丸体积，以预测儿童期接受双侧睾丸固定术的青春期男孩的亲子潜力。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Journal of Urology 148・3
• 作者: Kojima Y;Sasaki S;Kohri K;et al.
• 通讯作者: et al.

Correlation between the expression level of alpha1-adrenoceptor subtype mRNA and patient age or prostate volume in benign prostatic hyperplasia patients

良性前列腺增生患者α1肾上腺素受体亚型mRNA表达水平与患者年龄或前列腺体积的相关性

• 发表时间: 2007
• 作者: Kojima Y;et. al.
• 通讯作者: et. al.