エピジェネティクスを応用した幹細胞の創製とそれを用いた再生医療実現の可能性

应用表观遗传学创造干细胞以及利用它们实现再生医学的可能性

• 批准号: 18659600
• 负责人: 長山 勝
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659600/
• 关键词: 再生医療; 成体幹細胞; エピジェネティクス; 再分化; 分化転換; 神経細胞; 組織再生; 幹細胞; 分化誘導

本研究では従来より再生医療実現のための幹細胞の供給源として期待されてきたES細胞や組織特異的幹細胞に変わる新たな細胞供給源の確保の可能性につき検討することを目的とした。そこで患者自身の身体を構成している最終分化した機能細胞がなお分化の可塑性を有している可能性に着目し、生体内においては本来最終分化した機能細胞を別の機能細胞に再分化させ、各種の臓器・組織の再生に必要な細胞を確保することを試みた。まず、マウスの皮下脂肪組織より脂肪細胞を分離し、通常単層培養において真に成熟した脂肪細胞であることを確認した。この細胞を骨芽細胞分化条件下で培養することにより,これらの細胞が骨芽細胞の形質を有していることを確認し、脂肪細胞の骨芽細胞への再分化が可能であることを確認した。さらに骨組織より骨芽細胞を分離し、通常単層培養にてこの細胞が真に骨芽細胞であることを確認し、ついで神経分化誘導因子を含む培養条件下で培養を行うと、神経細胞の特徴である細胞突起の形成・伸長を形態学的に認め、さらに神経分化マーカーおよび神経細胞特異的蛋白質発現を確認し得、骨芽細胞が神経細胞への再分化能を有する可能性が確認された。さらにこれらの再分化過程を予め脱メチル化剤である5-azacitidineにて処理することにより分化転換が時間的に促進されることを確認した。またこれらの細胞にGFPをトランスフェクションし、安定発現クローンを得た。これらを先に示した培養方法によりそれぞれ骨芽細胞、神経細胞へと分化させた後、免疫不全マウスの脳内および骨欠損部へ移植し、移植後にこれら細胞の局在分布につきGFPをマーカーとして蛍光顕微鏡を用いて組織学的に観察したところ、移植部位にGFPを発現する細胞が観察され、これらの細胞、および方法が再生医療実現につながる可能性が示唆された。今後もこれらの細胞を用いて再生医療実現の可能性に付き検討を進める予定である。

This study is aimed at exploring the possibility of ensuring a new source of stem cells for regenerative medicine, in anticipation of ES cells and tissue-specific stem cells. The patient's own body constitution, final differentiation, functional cell differentiation, plasticity, possibility, in vivo final differentiation, functional cell differentiation, redifferentiation, and necessary cell regeneration of various organs and tissues are also examined. Subcutaneous fat cells are isolated and usually cultured in layers. It was confirmed that the osteoblasts could be cultured under the conditions of osteoblast differentiation, and that the osteoblasts could be redifferentiated from adipocytes. Isolation of bone bud cells from bone tissue, confirmation of cell differentiation from bone bud cells in normal monolayer culture, culture in the presence of differentiation inducing factors, identification of cell processes formation, elongation, morphological characteristics of neurons, identification of neuronal differentiation and neuronal cell-specific protein production The possibility of redifferentiation of osteoblasts into neurons was confirmed. The redifferentiation process is identified by 5-azacitidine treatment and by time of differentiation. The GFP gene was found in the cells. The culture method is shown in the following aspects: bone bud cells, neuronal cells, differentiation, immune deficiency, internal and bone defect, transplantation, post-transplantation, distribution of cells, GFP, microscopy, histological observation, observation of cells, GFP, transplantation site. The possibility of regenerative medicine being realized by different methods is demonstrated. The possibility of regenerative medicine in the future is discussed in detail.

项目成果

歯の再生 -歯の発生生物学から歯の再生研究まで-

牙齿再生 - 从牙齿的发育生物学到牙齿再生的研究 -

• 发表时间: 2006
• 作者: Yamada;Y.;Ueda;M.;et al.;Tetsuya Yuasa;大屋 盛道 ほか;Reiko Tokuyama;山田 陽一 ほか;Tetsuya Yuasa;Makoto Fukui;里村 一人
• 通讯作者: 里村 一人

Mclatonin at pharmacological doses enhances human osteoblastic differentiation in vitro and promotes mouse cortical bone formation in vivo.

药理学剂量的褪黑素可在体外增强人成骨细胞的分化，并在体内促进小鼠皮质骨的形成。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Journal of Pineal Research 41・2
• 作者: Honda;MJ;Shinohara Y;Hata KI;Ueda M;菊池貴博;Honda Masaki;道脇幸博;本田雅規・上田実;道脇幸博;菊池貴博;道脇幸博;海野 雅浩;道脇幸博;Fujii Keiko;山下夕香里;大野 由夏;菊池貴博;Yuka Oono;Kazuhito Satomura
• 通讯作者: Kazuhito Satomura

Expression of melatonin la receptor in the tooth germ.

褪黑激素1a受体在牙胚中的表达。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Journal of Dental Research 36・Special Issue A
• 作者: Yamada;Y.;Itano;N.et al.;Kazuhito Satomura;Kazuhito Satomura;Kazuhito Satomura
• 通讯作者: Kazuhito Satomura