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グリシン作動性神経伝達を遮断する遺伝子改変マウス作出への挑戦

挑战创造阻断甘氨酸神经传递的转基因小鼠

基本信息

批准号：
19650075
负责人：
柳川右千夫
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

グリシンは、脳幹や脊髄における主要な抑制性神経伝達物質として、神経の電位活動の制御に加えて、運動、呼吸、感覚情報処理など脳の機能を構築する上で重要な役割を果たしている。小胞型GABAトランスポーター(VGAT)とグリシン・トランスポーター2(GlyT2)とはグリシン作動性神経伝達に不可欠な分子であり、いずれもグリシン作動性ニューロンに局在するのでグリシン作動性ニューロンのマーカー蛋白として利用される。VGATは、グリシンのシナプス小胞への貯蔵を担い、GlyT2はグリシンのシナプス間隙からの除去とシナプス前終末内への再取込みを担う。本研究では、in vivoおよびin vitroにおけるグリシン作動性神経伝達の役割を明らかにする目的で、グリシン作動性ニューロン特異的にVGATをノックアウトしたマウス(グリシン作動性神経伝達遮断マウス)の作出を目指した。具体的には、グリシン作動性ニューロン特異的にCre recombinaseが発現するGlyT2-Creノックインマウスを作成し、条件付きVGATノックアウトマウス(VGAT-loxPマウス)と交配することにより作出することにした。既に作成したVGAT-loxPマウスは繁殖させ、維持した。GlyT2-Creノックインマウスに関しては、遺伝子標的法でGlyT2遺伝子のエクソン2にCre recombinase遺伝子をノックインした胚性幹細胞をマウス8細胞期胚に導入した結果、14匹のキメラマウスを得た。キメラマウスと野生型マウスとを交配し、生まれた仔についてサザンプロットを用いた遺伝子解析でGlyT2-Creノックインマウスを同定した。Cre recombinaseのグリシン作動性ニューロン特異的発現を確かめるためレポーターマウスと交配し、仔を得た。今後は、GlyT2-CreノックインマウスとVGAT-loxPマウスとを交配することにより、グリシン作動性神経伝達遮断マウスを得る。

The main inhibitory substances in the brain, the control of the potential activity of the brain, the function of movement, respiration, sensory information processing, and the construction of important services are: Small cell type GABA receptor (VGAT) and its receptor 2(GlyT2) and its receptor 2(GlyT2) can be used to stimulate the activation of the receptor. VGAT is responsible for the storage of cells, the removal of gaps in GlyT2 and the re-selection of terminals. This study aims to clarify the role of active neurotransmitter in vivo and in vitro, and to provide guidance for active neurotransmitter specific VGAT. The specific Cre recombinase activity is specific to GlyT2-Cre recombinase. VGAT-loxP is produced and maintained. GlyT2-Cre recombinase gene transfer method GlyT2-Cre recombinase gene transfer method GlyT2-Cre recombinase gene transfer method The wild type is the same as the wild type, and the wild type is different from the wild type. Cre recombinase activity is very important for the development of Cre recombinase. In the future, GlyT2-Cre can be used to detect the activity of VGAT-loxP.