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ピロリ菌以外のヘリコバクター感染と消化器疾患の因果関係の検討

幽门螺杆菌以外的幽门螺杆菌感染与胃肠道疾病的因果关系研究

基本信息

批准号：
19659113
负责人：
関谷幸江
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kitasato University (2008)Kitasato Institute (2007)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

「研究の目的」1.胃腸疾患におけるH.pylori以外のHelicobacter属細菌の感染の実態調査(特に胃MALTリンパ腫の起因菌としての可能性について)。2.H.heilmanniiのマウス感染モデルを用いた病原性解析及び抗菌剤のスクリーニングの試み。3.特異プライマーを用いたPCR法により糞便から胃あるいは腸に感染しているHelicobacter属細菌の検出・同定法を構築。「平成20年度研究実施計画および結果」1.生検材料採取並びに組織検査を行う(中村担当)。結果:倫理委員会の許可を得た後、薪たに3大学病院より胃検体を入手することができた。2.生検材料並びに研究協力医療機関から送られた組織険査標本からDNAを抽出し、PCR法にて菌の感染を検索する(関谷担当)。結果:MALT(mucosa-associated lymphoid tissue)リンパ腫16検体のうちHHLO(Helicobacter heilmannii-like organism)陽性は、6検体であった(37.5%)。一方、MALTリンパ腫を除く上部消化管疾患554検体のうちHHLO陽性は、4検体であった(0.7%)。3.PCR産物の塩基配列を決定し、菌種を同定する(関谷、村山担当)。結果:MALTリンパ腫陽性6検体の内訳(H.heilmannii1,H.suis3,同定不能3)。その他の上部消化管疾患4検体の内訳(H.suis2,同定不能2)。4.生検材料をマウスに感染させ、感染マウスの組織検査により菌の病原性を解析する(関谷、松井、中村担当)。結果:烏肌胃炎検体より分離したH.Suis(NSTW101株と命名)をC57BL/6マウスに感染させたところ、感染2ヶ月後に胃病変を確認した。5.H.heilmannii感染マウスへ各種抗菌剤を投与し、有効な抗菌剤を検索する(関谷、松井担当)。結果:H.heilmannii TKY株を感染させたC57BL/6に各種抗菌剤を投与して除菌効果と胃病態の変化を調べた。H.pyloriの除菌に用いられている通常の薬剤の組み合わせ(ランソプラゾール、アモキシリン、クラリスロマイシン)では、完全に除菌を行うことができなかった。また、胃の病態は除菌の程度に応じて快復した。6.H.heilmanniiの純粋培養を試みる(関谷、松井担当)。結果:感染マウスの胃懸濁液からH.pylor抗体を結合させたナノ粒子を用いてH.heilmanniiを分離し、カンピロバクター用の培地に塗布し、混合ガス(10%CO_2,6%H_2,79%N_2)を充填させたデシケーター内で培養を試みた。37℃の孵卵器にデシケーターを2ヶ月設置後、微少のコロニーを認めた。そこでこのコロニーからDMAを調製し、PCRにより菌種の同定を行ったところ、H.heilmanniiであった。7.平成20年度までに検出したHelicobacter属細菌と胃腸疾患の因果関係について解析する(関谷担当)。結果:胃MALTリンパ腫とH.heilmannii感染の因果関係が証明された。

の "research purposes" 1. Gastrointestinal disorders における H.p ylori outside の Helicobacter bacteria genus の infection の be state survey (especially に gastric MALT リ treated ンパ bacteria cause swollen のとしての possibility について). 2. H.h eilmannii のマウス infection モデルを with いた pathogenicity and び antibacterial tonic のスクリーニングみの try. 3. Specific プライマーを with いた PCR method により feces から stomach あるいは infection にしている bacteria Helicobacter genus の検 · を building with fixed method. "Results of the Research Implementation Plan for Heisei 20 および" 1. Collection of 検 materials and びに organization of 検 investigation を work う(by Nakamura). Results: ethics committee の licensing を after た, pay たに 3 university hospital より stomach 検を sandbody することができた. 2. Raw material 検 and びに study together medical machine masato から send られた organization 険 check specimen からを DNA extraction し, PCR method にのて bacteria infection を検 cable する (masato valley). Results :MALT(mucosa-associated lymphoid tissue)リ <s:1> パパ is positive for 16検 with うちHHLO(Helicobacter heilmannii-like organism) and 6検であった(37.5%). Side, MALT リ treated ンパ swollen を except く upper alimentary canal diseases 554 検 body のうち HHLO positive は, 4 検であった (0.7%). 3. The binding of the sulfate base of the PCR product is を to determine を, and the strain is を to be determined する(handled by Sekigaya and Murayama). Result :MALTリパパ is positive for 6検 in the <s:1> (H.heilmannii1,H.suis3, definitely not 3). Youdaoplaceholder0 そ his <s:1> upper digestive tract disorder 4検 in the body <e:1> 訳(H.suis2, definitely not 2). 4. Raw material 検をマウスに infection させ, infection マウスの organization 検 check により bacteria の pathogenicity を parsing する (masato valley, matsui, nakamura bear). Results: umm 検 body muscle gastritis より separation した H.S uis (NSTW101 strains と) を C57BL / 6 マウスに infection させたところ, infection after ヶに stomach trouble - を confirm した. 5.H. Heilmannii infection ウスへ various antibacterial agents を administered to を, effective な antibacterial agents を検 and する(by Segunya and Matsui). Result :H.heilmannii TKY strain を infection させたC57BL/6に various antibacterial agents を administration and <s:1> て antibacterial effect と gastric pathological <s:1> transformation をべたべた H.p ylori の aseptic に with いられている usually の薬 tonic の group み close わせ (ランソプラゾール, アモキシリン, クラリスロマイシン) では, completely に aseptic line をうことができなかった. Youdaoplaceholder0, pathological gastric lesion た, degree of sterilization of the lesion に応じて is about to recover <s:1> た. 6.H. Heilmannii <s:1> Pure 粋 culture を test みる(by Setani and Matsui). Results: the infection マウスの stomach suspension から H.p を ylor antibody combining させたナをノ particles with いて H.h eilmannii を separation し, カンピロバクター with の petty に coated し, mixed ガス (79% 10% CO_2, 6% H_2, N_2) を filling させたデシケーターで training within を try みた. After setting up the 37 ° C <s:1> incubator for にデシケ, タ and を for 2ヶ months, a little <s:1> コロニ and を recognize めた. そこでこのコロニーから DMA を modulation し, PCR により strains の with fixed line をったところ, H.h eilmannii であった. 7. In Heisei 20, までに検 revealed the causal relationship between <s:1> Helicobacter bacteria と gastrointestinal disorders にまでに検ててて analysis する(by Masato Sekichi). Result: Causal relationship of gastric MALTリパパ abscess とH.heilmannii infection lesion が proof された.