ピロリ菌以外のヘリコバクター感染と消化器疾患の因果関係の検討

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「研究の目的」1.胃腸疾患におけるH.pylori以外のHelicobacter属細菌の感染の実態調査(特に胃MALTリンパ腫の起因菌としての可能性について)。2.H.heilmanniiのマウス感染モデルを用いた病原性解析及び抗菌剤のスクリーニングの試み。3.特異プライマーを用いたPCR法により糞便から胃あるいは腸に感染しているHelicobacter属細菌の検出・同定法を構築。「平成20年度研究実施計画および結果」1.生検材料採取並びに組織検査を行う(中村担当)。結果:倫理委員会の許可を得た後、薪たに3大学病院より胃検体を入手することができた。2.生検材料並びに研究協力医療機関から送られた組織険査標本からDNAを抽出し、PCR法にて菌の感染を検索する(関谷担当)。結果:MALT(mucosa-associated lymphoid tissue)リンパ腫16検体のうちHHLO(Helicobacter heilmannii-like organism)陽性は、6検体であった(37.5%)。一方、MALTリンパ腫を除く上部消化管疾患554検体のうちHHLO陽性は、4検体であった(0.7%)。3.PCR産物の塩基配列を決定し、菌種を同定する(関谷、村山担当)。結果:MALTリンパ腫陽性6検体の内訳(H.heilmannii1,H.suis3,同定不能3)。その他の上部消化管疾患4検体の内訳(H.suis2,同定不能2)。4.生検材料をマウスに感染させ、感染マウスの組織検査により菌の病原性を解析する(関谷、松井、中村担当)。結果:烏肌胃炎検体より分離したH.Suis(NSTW101株と命名)をC57BL/6マウスに感染させたところ、感染2ヶ月後に胃病変を確認した。5.H.heilmannii感染マウスへ各種抗菌剤を投与し、有効な抗菌剤を検索する(関谷、松井担当)。結果:H.heilmannii TKY株を感染させたC57BL/6に各種抗菌剤を投与して除菌効果と胃病態の変化を調べた。H.pyloriの除菌に用いられている通常の薬剤の組み合わせ(ランソプラゾール、アモキシリン、クラリスロマイシン)では、完全に除菌を行うことができなかった。また、胃の病態は除菌の程度に応じて快復した。6.H.heilmanniiの純粋培養を試みる(関谷、松井担当)。結果:感染マウスの胃懸濁液からH.pylor抗体を結合させたナノ粒子を用いてH.heilmanniiを分離し、カンピロバクター用の培地に塗布し、混合ガス(10%CO_2,6%H_2,79%N_2)を充填させたデシケーター内で培養を試みた。37℃の孵卵器にデシケーターを2ヶ月設置後、微少のコロニーを認めた。そこでこのコロニーからDMAを調製し、PCRにより菌種の同定を行ったところ、H.heilmanniiであった。7.平成20年度までに検出したHelicobacter属細菌と胃腸疾患の因果関係について解析する(関谷担当)。結果:胃MALTリンパ腫とH.heilmannii感染の因果関係が証明された。