权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

Nphs2遺伝子変異マウスの血圧解析

Nphs2基因突变小鼠血压分析

基本信息

批准号：
19659216
负责人：
杉山文博
金额：
$ 2.11万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

研究実施者は、ゲノムワイドなハプロタイプ解析が新たな病態モデル動物を作製するための有用な解析方法であることを明らかにするため、本研究において高血圧の基準系統であるSWR系統(近交系マウスにおいてNZOと同様に高血圧形質を示した系統)より胚性幹(ES)細胞を樹立し、SWR系統Nphs2遺伝子を低血圧系統Nphs2遺伝子(C3HやA/J)に置換したマウスを作製することを目的として研究を進めた。しかしながらSWRからのES細胞樹立が困難であったため、前年度においてNphs2においてSWRマウスのハプロタイプと同じC57BL/6マウスの代替ES細胞として樹立した。そこで本年度は以下の実験を実施した。樹立ES細胞について更に詳細な生殖細胞移行能力を更に検討した。・ターゲティング操作に対しES細胞はin vitroのレベルで多能性保持が確認された。・コントロールターゲティング・ベクターについて生殖系列移行キメラマウスの作製に成功した。前年度にNphs2ターゲティングベクターの構築に遅れが生じたため本年度に引続き構築を実施した。・PCRをべ一スとしたクローニングによりA/JのNphs2と相同するアームを調整、LoxP配列にてネオマイシン謝性遺伝子を挟み込んだターゲティングベクターを作製した。Nphs2ターゲティングES細胞の作製・ポジティブ選別後、PCR解析およびサザン解析の結果を行い、2クローンのES細胞がC57BL/6の遺伝的背景においてヘテ白接合体のNphs2がA/Jハプロタイプに組換わっていることが確認された(ネオマイシン耐性遺伝子はKOマウス作製後ネフリンCreで飛ばすことに変更した)。Nphs2キメラマウスの作製・ICRマウス8細胞胚とターゲティングしたES細胞を凝集させキメラ胚を作製後、偽妊娠マウスに移植し、高キメリズムなマウスを3匹得た。現在生殖系列移行を確認中である。

The authors of this study are interested in the analysis of new pathological animal models and useful analytical methods for high blood pressure reference systems.(Inbred strain NZO and high blood pressure type of expression system) Embryonic stem (ES) cells were established, SWR system Nphs2 gene and low blood pressure system Nphs2 gene (C3H and A/J) were replaced and controlled. ES cells are difficult to establish in the previous year, and C57BL/6 cells are difficult to establish in place of ES cells. This year, the following measures have been implemented: To establish ES cells, more detailed information on germ cell migration is needed. The pluripotency of ES cells is maintained in vitro. The reproductive series migration is successful. The previous year's Nphs2 had to be built. This year's Nphs 2 had to be built. A/J's Nphs2 is the same as the PCR. A/J's Nphs2 is the same as the PCR. Nphs2 gene selection, PCR analysis and service analysis results were performed on ES cells from Nphs2 gene pool and C57BL/6 gene pool. Nphs2 Now reproductive series migration is confirmed.