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Biological functions of alternative splicing on mouse gastrulation

选择性剪接对小鼠原肠胚形成的生物学功能

基本信息

批准号：
20H00444
负责人：
杉山文博
金额：
$ 28.87万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では我々独自の蛍光ノックインマウスを利用して、原腸胚形成における各胚葉で機能的なスプラシングバリアントの特定を目指す。本年度は、各々の胚葉を蛍光で識別可能なMIERUマウス(外胚葉マーカーとしてOtx2遺伝子にtdTomatoが、中胚葉マーカーとしてT遺伝子にTagBFPが、内胚葉マーカーとしてSox17遺伝子にEGFPがそれぞれbicistronicにノックインされている）ES細胞にCRISPR-Cas9を導入し、ある共通的な特徴をもつ遺伝子群のそれぞれに対するgRNAと組み合わせ、三胚葉が可視化可能な潜在能力を持つKO-ES細胞を12系統樹立した。なお、各系統で少なくとも2つ以上の独立したクローンが得られており、KOアレルの配列も決定している。これらのES細胞から胚盤胞補完法を用いることで、三胚葉可視化KO-原腸胚を発達させた。更に、胚葉毎異なる蛍光タンパクを利用したFACSにて胚葉特異的な細胞集団を分取した。なお、非遺伝子破壊MIERUマウスES細胞を用いたコントロール実験において、各胚葉特異的な細胞分取が成功したことをRNA-Seq解析で確認している。スモールサンプルからスプラシングバリアントを特定することが可能であると報告されたあるRNA-Seq法により、上述の三胚葉可視化KO-原腸胚から分取した胚葉特異的な細胞集団における遺伝子発現解析を実施した。これまでに6遺伝子の三胚葉可視化KO-原腸胚の遺伝子発現解析データを所得済みであり、現在はそのデータ解析を実施している。

The purpose of this study is to use the original embryo to form the specific target of each embryo in order to improve the mechanical energy of each embryo. This year, each embryo may have MIERU genes (ectoderm

项目成果

期刊论文数量（12）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

哺乳類の胎児発生に必要な遺伝子座を発見～Cables２と隣接遺伝子の不思議な関係～

发现哺乳动物胎儿发育所需的基因位点 - Cables 2 与邻近基因之间的神秘关系 -

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

The University of Edinburgh Edinburgh(英国)

爱丁堡大学爱丁堡（英国）

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

The Australian National University(オーストラリア)

澳大利亚国立大学（澳大利亚）

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

三胚葉形成を可視化するトリプルノックインレポーターシステムの開発

开发三重敲入报告系统以可视化三叶细胞形成

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
鈴木颯;村田知弥;大徳陽子;濱田優子;谷本陽子;水野聖哉;杉山文博
通讯作者：
杉山文博

A novel creation of reporter mouse model for visualizing germ layer formation

一种新颖的报告小鼠模型，用于可视化胚层形成

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Hayate Suzuki;Tra Thi Huong Dinh;Yoko Daitoku;Kanako Kato;Yoko Tanimoto;Kazuya Murata;Seiya Mizuno;Fumihiro Sugiyama
通讯作者：
Fumihiro Sugiyama