siRNAによる歯周組織再生の試み

尝试使用 siRNA 进行牙周组织再生

• 批准号: 19659514
• 负责人: 中村 正明
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Osaka Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659514/
• 关键词: S100A4遺伝子; siRNA; 歯周組織再生; in vitro; 未分化間葉系幹細胞; ティッシュエンジニアリング; siSTABLE

研究の目的:未分化間葉系幹細胞(MSCs)は組織再生で移植組織や器官として分化することが可能であり,骨芽細胞から骨へ分化させることもできる.S100A4遺伝子はS100カルシウム結合蛋白に属しており,MSCsでの骨芽細胞遺伝子発現を抑制し骨芽細胞分化を調整している.また,RNAiは遺伝子特異的な翻訳後のサイレンシングであり,遺伝子サイレンシングとして強力なツールとなり得る.そこで我々はヒトMSCsにおいて,S100A4遺伝子をRNAiにて発現阻害し骨芽細胞へ分化させることを試みた.さらに,MSCsでのS100A4遺伝子の発現阻害による影響を,マイクロアレイを用いて観察した.研究実施計画と成果:ヒトMSCを培養し,S100A4 siRNAを細胞内に導入した.Real time PCRを行い,S100A4遺伝子の発現を定量的に観察した.同様にReal-time PCR microarray analysisでは84の骨形成遺伝子発現を分析した.また,Western blotによりS100A4遺伝子の蛋白レベルの発現を観察した.S100A4siRNA導入3,7,14,21日後,すべての濃度でコントロールと比較して,S100A4遺伝子発現が抑制された.Western blotではS100A4siRNA導入7,14,21日後でS100A4遺伝子蛋白発現が抑制されていた.遺伝子導入3日後では37の遺伝子が,コントロールと比較して2倍以上あるいは,0.5倍以下の発現変化がみられた.導入7,14,21日後ではそれぞれ29,4,10の遺伝子が変化した.本研究では,MSCsのS100A4遺伝子発現抑制により,多数の骨関連遺伝子発現が上昇した.今回用いたアプローチと適切な遺伝子デリバリーシステムを開発することによって,1つの有効なティッシュエンジニアリングの手法として応用可能になるものと考えている.

研究的目的：未分化的间充质干细胞（MSC）可以通过组织再生作为移植组织和器官区分，并且也可以从成骨细胞到骨骼区分。 S100A4基因属于S100钙结合蛋白，可抑制MSC中成骨细胞的表达并调节成骨细胞分化。此外，RNAi是一种基因特异性翻译后沉默，可以成为基因沉默的强大工具。因此，我们试图抑制人类MSC中S100A4基因的表达，以区分成骨细胞。此外，使用微阵列观察到了MSC中S100A4基因表达的抑制作用。研究实施计划和结果：培养人类MSC，并将S100A4 siRNA引入细胞中。进行实时PCR以定量观察S100A4基因的表达。同样，通过实时PCR微阵列分析分析了84个骨形成基因的表达。蛋白质印迹显示S100A4基因的蛋白质水平。与对照组相比，所有浓度的S100A4基因表达均被抑制。与对照相比，蛋白质印迹显示S100A4基因的抑制表达。蛋白质印迹中，在引入S100A4SIRNA后7、14和21天抑制S100A4基因蛋白的表达。与对照组相比，在基因引入后3天，37个基因的表达变化2次或低于0.5倍。诱导后的7、14和21天，分别改变了29、4和10基因。在这项研究中，MSC中S100A4基因表达的抑制增加了许多骨相关基因的表达。通过开发本文中使用的一种方法和适当的基因输送系统的开发，它可以用作有效的组织工程技术。

项目成果

Preparation of injectable 3D-formed β-tricalcium phosphate bead/alginate composite for bone tissue engineering

• DOI: 10.4012/dmj.27.827
• 发表时间: 2008-11-01
• 期刊: DENTAL MATERIALS JOURNAL
• 影响因子: 2.5
• 作者: Matsuno, Tomonori;Hashimoto, Yoshiya;Satoh, Tazuko
• 通讯作者: Satoh, Tazuko

S100A4遺伝子発現抑制した未分化間葉系幹細胞による骨再生その4siSTABLEOを用いた骨分化関連蛋白質の挙動

S100A4 基因表达受到抑制的未分化间充质干细胞进行骨再生：使用 4siSTABLEO 观察骨分化相关蛋白的行为

• 发表时间: 2007
• 作者: 平 雅之;佐々木 大輔;木寸 重信;澤田 剛光;杉山 芳樹;荒木 吉馬;Yamada A.;Yasuhara R.;Anada T.;Toda Y;Miyazono A;Matsumura K;舘 慶太;舘 慶太;岡野亜希子;宮園あがさ;早川世志子;井汲 憲治;橋本典也;橋本典也;橋本典也;橋本典也;安達 清太
• 通讯作者: 安達 清太

ヒト未分化間葉系幹細胞でのS100A4 siRNAによる骨分化関連遺伝子への影響

S100A4 siRNA对人未分化间充质干细胞成骨分化相关基因的影响

• 发表时间: 2008
• 作者: 平 雅之;佐々木 大輔;木寸 重信;澤田 剛光;杉山 芳樹;荒木 吉馬;Yamada A.;Yasuhara R.;Anada T.;Toda Y;Miyazono A;Matsumura K;舘 慶太;舘 慶太;岡野亜希子;宮園あがさ;早川世志子;井汲 憲治;橋本典也;橋本典也;橋本典也
• 通讯作者: 橋本典也

Effect of genes related to osteogenic differentiation by S100A4 siRNA in human mesenchymal stem cells.

S100A4 siRNA 对人间充质干细胞成骨分化相关基因的影响。

• 发表时间: 2008
• 期刊: J Oral Tissue Engin 6
• 作者: 平 雅之;佐々木 大輔;木寸 重信;澤田 剛光;杉山 芳樹;荒木 吉馬;Yamada A.;Yasuhara R.;Anada T.;Toda Y;Miyazono A;Matsumura K;舘 慶太;舘 慶太;岡野亜希子;宮園あがさ;早川世志子;井汲 憲治;橋本典也
• 通讯作者: 橋本典也