siRNAによる歯周組織再生の試み

尝试使用 siRNA 进行牙周组织再生

• 批准号: 19659514
• 负责人: 中村 正明
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Osaka Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659514/
• 关键词: S100A4遺伝子; siRNA; 歯周組織再生; in vitro; 未分化間葉系幹細胞; ティッシュエンジニアリング; siSTABLE

研究の目的:未分化間葉系幹細胞(MSCs)は組織再生で移植組織や器官として分化することが可能であり,骨芽細胞から骨へ分化させることもできる.S100A4遺伝子はS100カルシウム結合蛋白に属しており,MSCsでの骨芽細胞遺伝子発現を抑制し骨芽細胞分化を調整している.また,RNAiは遺伝子特異的な翻訳後のサイレンシングであり,遺伝子サイレンシングとして強力なツールとなり得る.そこで我々はヒトMSCsにおいて,S100A4遺伝子をRNAiにて発現阻害し骨芽細胞へ分化させることを試みた.さらに,MSCsでのS100A4遺伝子の発現阻害による影響を,マイクロアレイを用いて観察した.研究実施計画と成果:ヒトMSCを培養し,S100A4 siRNAを細胞内に導入した.Real time PCRを行い,S100A4遺伝子の発現を定量的に観察した.同様にReal-time PCR microarray analysisでは84の骨形成遺伝子発現を分析した.また,Western blotによりS100A4遺伝子の蛋白レベルの発現を観察した.S100A4siRNA導入3,7,14,21日後,すべての濃度でコントロールと比較して,S100A4遺伝子発現が抑制された.Western blotではS100A4siRNA導入7,14,21日後でS100A4遺伝子蛋白発現が抑制されていた.遺伝子導入3日後では37の遺伝子が,コントロールと比較して2倍以上あるいは,0.5倍以下の発現変化がみられた.導入7,14,21日後ではそれぞれ29,4,10の遺伝子が変化した.本研究では,MSCsのS100A4遺伝子発現抑制により,多数の骨関連遺伝子発現が上昇した.今回用いたアプローチと適切な遺伝子デリバリーシステムを開発することによって,1つの有効なティッシュエンジニアリングの手法として応用可能になるものと考えている.

Objective: Undifferentiated mesenchymal stem cells (MSCs) can regenerate tissue and differentiate into transplanted tissues and organs, and bone bud cells can differentiate into osteoblasts. S100A4 gene can inhibit the expression of S100-binding protein in MSCs, and regulate the differentiation of bone bud cells. RNAi is the most powerful gene in the world. S100A4 RNA is a gene that can inhibit the differentiation of bone bud cells. In addition, S100A4 gene in MSCs can inhibit the development of MSCs. Results: S100A4 siRNA was introduced into MSCs in culture.Real time PCR was performed to detect the expression of S100A4 siRNA quantitatively. Real-time PCR microarray analysis of 84 bone morphogenetic markers was also performed. Western blot analysis showed that protein expression of S100A4 gene was inhibited at 3, 7, 14, and 21 days after introduction of S100A4 siRNA. 3 days after the introduction of the gene, 37 genes were introduced, and the gene was more than 2 times and less than 0.5 times. After 7, 14 and 21 days of introduction, there will be a change in the number of descendants of 29, 4 and 10. In this study, S100A4 gene expression of MSCs was inhibited, and most bone-related gene expression was increased. This article reviews the development of the application of the new technology in the field of information technology, and discusses the application of the new technology.

项目成果

Preparation of injectable 3D-formed β-tricalcium phosphate bead/alginate composite for bone tissue engineering

• DOI: 10.4012/dmj.27.827
• 发表时间: 2008-11-01
• 期刊: DENTAL MATERIALS JOURNAL
• 影响因子: 2.5
• 作者: Matsuno, Tomonori;Hashimoto, Yoshiya;Satoh, Tazuko
• 通讯作者: Satoh, Tazuko

S100A4遺伝子発現抑制した未分化間葉系幹細胞による骨再生その4siSTABLEOを用いた骨分化関連蛋白質の挙動

S100A4 基因表达受到抑制的未分化间充质干细胞进行骨再生：使用 4siSTABLEO 观察骨分化相关蛋白的行为

• 发表时间: 2007
• 作者: 平 雅之;佐々木 大輔;木寸 重信;澤田 剛光;杉山 芳樹;荒木 吉馬;Yamada A.;Yasuhara R.;Anada T.;Toda Y;Miyazono A;Matsumura K;舘 慶太;舘 慶太;岡野亜希子;宮園あがさ;早川世志子;井汲 憲治;橋本典也;橋本典也;橋本典也;橋本典也;安達 清太
• 通讯作者: 安達 清太

ヒト未分化間葉系幹細胞でのS100A4 siRNAによる骨分化関連遺伝子への影響

S100A4 siRNA对人未分化间充质干细胞成骨分化相关基因的影响

• 发表时间: 2008
• 作者: 平 雅之;佐々木 大輔;木寸 重信;澤田 剛光;杉山 芳樹;荒木 吉馬;Yamada A.;Yasuhara R.;Anada T.;Toda Y;Miyazono A;Matsumura K;舘 慶太;舘 慶太;岡野亜希子;宮園あがさ;早川世志子;井汲 憲治;橋本典也;橋本典也;橋本典也
• 通讯作者: 橋本典也

Effect of genes related to osteogenic differentiation by S100A4 siRNA in human mesenchymal stem cells.

S100A4 siRNA 对人间充质干细胞成骨分化相关基因的影响。

• 发表时间: 2008
• 期刊: J Oral Tissue Engin 6
• 作者: 平 雅之;佐々木 大輔;木寸 重信;澤田 剛光;杉山 芳樹;荒木 吉馬;Yamada A.;Yasuhara R.;Anada T.;Toda Y;Miyazono A;Matsumura K;舘 慶太;舘 慶太;岡野亜希子;宮園あがさ;早川世志子;井汲 憲治;橋本典也
• 通讯作者: 橋本典也