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バイオインテリジェント化幹細胞を用いた歯周組織移植療法の開発

利用生物智能干细胞开发牙周组织移植疗法

基本信息

批准号：
19659548
负责人：
山田聡
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)歯根膜細胞への外来遺伝子導入条件の検討GFP発現プラスミドベクターをリポフェクション法、エレクトロポレーション法、センダイウイルス法を用いて細胞に遺伝子導入し、各方法における導入効率を比較検討した。ホスト細胞として、マウス歯根膜細胞株MPDL22、ヒト腎由来293細胞、マウス胚性細胞株ECP19を用いた。GFP発現ベクターの導入効率をレーザー蛍光顕微鏡にて観察したところ、293細胞およびECP19細胞には何れの導入方法でもGFP遺伝子を導入することが可能であったが、MPDL22には唯一エレクトロポレーション法のみが有効であった。(2)歯根膜遺伝子導入による細胞のバイオインテリジェント化誘導歯根膜遺伝子として、PLAP-1、Periostin、SFRP4、ID1を選定し、各遺伝子発現ベクターを構築した。上記(1)にて決定した条件でMPDL22に遺伝子導入した。各遺伝子導入細胞を硬組織形成誘導培地にて長期に培養し、石灰化マーカーであるアルカリフォスファターゼ活性および石灰化物形成能を測定した。その結果、PLAP-1、SFRP4導入により歯根膜細胞の硬組織形成分化が抑制を受けた。そのメカニズムは、PLAP-1はBMP-2/4、TGF-β等のTGFスパーファミリー分子の機能阻害、SFRP4はWnt分子の機能阻害である可能性が強く示唆された。一方、Periostin遺伝子導入により、歯根膜細胞の石灰化が促進された。ID1導入では歯根膜細胞の分化には影響を認めなかった。以上の結果からPLAP-1、SFRP4、Periostinは歯根膜細胞のバイオインテリジェント化に利用可能な遺伝子であることが示唆された。

(1) 歯 root membrane cells への foreign heritage 伝 import conditions の検 for GFP 発 now プラスミドベクターをリポフェクション method, エレクトロポレーション method, センダイウイルをス method with いて cells に heritage 伝 import し, each method における import beg しを sharper rate comparison 検た. ホスト cells として, マウス歯 root membrane cell lines MPDL22, ヒト renal origin 293 cells, マウス embryonic cell lines ECP19 を with いた. GFP 発 now ベクターの import working rate をレーザー蛍 light 顕 micromirror にて観 examine したところ, 293 cells および ECP19 cells には what れの import method でも GFP heritage 伝 son を import することが may であったが, MPDL22 には only エレクトロポレーション method のみが have sharper であった. (2) 歯 root membrane heritage 伝 son import による cells のバイオインテリジェント change induced 歯 root membrane heritage 伝 son として, PLAP - 1, Periostin, SFRP4, ID1 をし selected, all survived 伝発 now ベクターを build した. The above record (1)にて determines the <s:1> condition でMPDL22に remnant 伝 to be imported into たた. The heritage 伝 import cells を hard tissue formation induced the petty にて long-term にし, calcification マーカーであるアルカリフォスファターゼ active および lime compound formation can measure をした. Youdaoplaceholder0 そ results, PLAP-1, SFRP4 introduction によ歯歯 root membrane cell <s:1> hard tissue formation and differentiation が inhibition を is affected by けた. そのメカニズムはは BMP, PLAP - 1-2/4, TGF - beta の TGF スパーファミリー molecular の function resistance to harm, SFRP4 は Wnt function of molecular の resistance against である strong possibility がく in stopping された. One side, Periostin remains 伝 are introduced into によ, 歯 root membrane cells <s:1> callization が promotes された. The introduction of ID1 into でで歯歯 root membrane cells and the effect of にに on を recognition めなをったったった. の above results から PLAP - 1, SFRP4, Periostin は歯 root membrane cells のバイオインテリジェント change に may use な heritage 伝 son であることが in stopping された.