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血液脳関門への新規siRNAデリバリー法の開発

开发一种新的 siRNA 血脑屏障递送方法

基本信息

批准号：
20659138
负责人：
横田隆徳
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々の開発したビタミンE結合siRNA(VE-siRNA)に蛍光色素であるCy3を標識させ、リン酸緩衝食塩水に溶解してマウスの尾静脈から投与したところ、大脳皮質や線条体、海馬を始めとした脳のあらゆる部位に血管に沿ったCy3シグナルを認めた。Cy3シグナルの強度はVE-siRNAの容量に依存して強く、また投与してからの時間が短いほど(特に1時間以内)強く観察された。血管内皮細胞のマーカーであるvon Willebrand因子の抗体を用いた免疫染色にて、このCy3シグナルが脳血管内皮細胞に局在することが判明した。神経細胞やグリア細胞といった他の細胞には、Cy3シグナルはわずかに観察されるのみであった。ビタミンEを結合させていない同じ塩基配列のsiRNAを投与した場合は脳内にCy3シグナルは見られなかった。ビタミンEの代わりにコレステロールを結合させたChol-siRNAの場合には、VE-siRNAと同様に脳血管内皮細胞に一致したCy3シグナルが見られ、その輝度もVE-siRNAの場合と同程度であった。VE-siRNAとChol-siRNAの機能の差異については、全脳から抽出したRNAを用いてRT-PCR法を行うことで、現在評価している段階である。以上より、ビタミンEやコレステロールといった脂質を結合させたsiRNAを、ウイルスやリポソームを始めとしたベクターを用いることなく、単独で静脈内投与するのみで脳血管内皮細胞へのデリバリーが可能になると考えられた。多発性硬化症などの免疫疾患や脳梗塞といった脳血管内皮細胞が病態形成に関与している疾患の治療に、我々の開発したVE-siRNAが応用できる見込みがあると思われた。さらに、今回の研究から、侵襲性の高い処置を必要とせずベクターの投与に伴う副作用も考慮しなくてよいことから、臨床応用がしやすいという大きな長所を見出すことができた。

We use the combination of siRNA (VE-siRNA) light pigments to detect the Cy3 label, to dissolve the water in the water, and to make sure that the blood vessels in the parts of the body, the body and the body of the body, the blood vessels of the parts of the body, the body, the body The strength of the Cy3 system depends on the strength of the VE-siRNA capacity, and the operating time is short (within 1 hour) to strengthen the monitoring performance. The antibody against von Willebrand factor was identified by immunostaining and Cy3 staining. God knows how to treat his cell, Cy3 cell, cell phone, cell phone, cell, cell. This is the same as the basic configuration of the siRNA system. This is the combination of the Cy3 investment and the data allocation. The combination of Chol-siRNA and VE-siRNA was similar to that of vascular endothelial cells, and that of Cy3 and VE-siRNA was the same. The VE-siRNA Chol-siRNA machine is capable of monitoring, and the whole RNA is extracted using the RT-PCR method, which is now available. The following information is available: the combination of siRNA, intravenous infusion, intravenous infusion, and vascular endothelial cell therapy. Multiple sclerosis (MS), immune disease, infarct, vascular endothelial cell formation, vascular endothelial cell formation, and treatment of multiple sclerosing diseases. We will start a VE-siRNA treatment program. This time, this time, the study was conducted, and the necessary drugs and side effects were tested, and the bed was used in the hospital.