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Kennedy-Alter-Sung症候群の病態モデルの構築

Kennedy-Alter-Sung综合征病理模型的构建

基本信息

批准号：
07557341
负责人：
横田隆徳
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至 1996
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、CAGリピートの増加したアンドロゲンレセプター(androgen receptor,AR)の神経細胞におけるneural plasticityへの影響を解析するとともに、CAGリピートの増加により発現異常をきたしたAR標的分子を検索し、CAGリピートの増加に関わる神経細胞変性機序の解明を目的としている。神経細胞分化の研究に用いられてきたPC12細胞は、ARを発現していないため遺伝子導入したARの細胞への影響を評価する上で適している。今回、PC12に正常CAGリピート数のAR全長cDNA、CAGリピートが増加したAR全長cDNAを導入した。ARによる効果が、ホルモン結合、DNA結合部位を介したものかどうかを検討するために、ホルモン及びDNA結合部位を欠く正常及びCAGリピートの増加したエクソン1のみの導入も併せて行った。正常及びCAGリピートの増加したヒトARのcDNA全長とヒトARのエクソン1領域のクローニングを行った。それぞれをpRc/CMVベクターにサブクローニングし、自動シークエンサーにてシークエンスを確認した。遺伝子導入は、エレクトロポレーションにて行い、ネオマイシン耐性株をクローン化する。AR発現量は、ノーザンブロット解析にて検討しARの高い発現量を示すクローンを選別した。全長cDNAを導入したクローンは、アンドロゲンバインデング活性を検討し、アンドロゲンバインデング活性のあるクローンを実験に使用する。ARcDNA及びエクソン1を導入したPC12に神経成長因子を添加し、分化誘導させる。PC12のneural plasticityの評価は、細胞当たり平均神経突起長、神経突起数、神経突起面積などを視標として検討する。AR遺伝子のCAGリピート数の増加による変化を解析し、CAGリピート増加に伴う神経細胞変性機序について検討中である。

The purpose of this study is to analyze the effects of CAG receptor (AR) growth on neural plasticity in neurons and to elucidate the mechanisms of neuronal plasticity associated with CAG receptor growth. In the study of neuronal differentiation, the expression of AR in PC12 cells was studied. Now, PC12 has introduced the AR full-length cDNA, CAG full-length cDNA and CAG full-length cDNA. AR binding effect, DNA binding site, and CAG binding site. Normal and CAG: Increase in AR cDNA Length: Increase in AR cDNA Length: The pRc/CMV server is configured to automatically identify the server. The gene is introduced into the resistant strain, and the resistant strain is transformed. AR emissions are selected for AR high emissions analysis. The full-length cDNA was introduced into the genome, and the genome activity was detected. ARcDNA and PC1 were introduced into PC12 and the growth factors were added and differentiated. The evaluation of PC12 neural plasticity, cell function, average neurite length, neurite number, neurite area, and visual index were discussed. The increase of CAG content in AR gene is accompanied by the change of neuron content.