ES細胞を用いたsiRNAによる新しいノックダウンマウス作製法の開発

使用 ES 细胞使用 siRNA 开发新的敲除小鼠生产方法

• 批准号: 16650091
• 负责人: 横田 隆徳
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16650091/
• 关键词: RNAi; トランスジェニックマウス; SOD1; shRNA; ES細胞; キメラマウス

ES細胞に未発現のターゲット遺伝子のへshRNAの導入の第1段階としてハイグロマイシン耐性フィーダーを用いて、ターゲットの直鎖状化したHAタグ遺伝子を融合させた未発現遺伝子であるG93ASOD1変異遺伝子を発現ベクターに組み込み、これをエレクトロポレーションした。ハイグロマイシンで耐性ES細胞を選択して、50個の耐性ES細胞クローンの中からHAタグでウエスタンブロットを行いターゲット遺伝子を安定を発現したES細胞クローンが得られた。第2段階として未発現遺伝子が安定発現したES細胞ラインに対して、直鎖状化したShort-hairpinタイプのsiRNA発現ベクターをエレクトロポレーションしてネオマイシンでshRNAを安定発現ES細胞をクローン化した。HAタグタグでウエスタンブロットを行いターゲットG93ASOD1遺伝子発現が抑制されているG93ASOD1変異遺伝子とshRNAの両者が安定発現し、第1段階で発現させたG93ASOD1を有効に抑制しているES細胞クローンが作製できた。現在このダブル遺伝子安定発現ES細胞クローンをブラストシストにマイクロインジェクションしてキメラマウスを複数のクローンで作製したが、ESの寄与率が悪く、トラブルシュートとして第1段階のES細胞クローンでキメラマウスを作製中である。

に not 発 ES cells is の タ ー ゲ ッ ト posthumous son 伝 の へ shRNA の import order と paragraph 1 の し て ハ イ グ ロ マ イ シ ン patience フ ィ ー ダ ー を with い て, タ ー ゲ ッ ト の straight lock turn し た HA タ グ heritage 伝 son を fusion さ せ た 発 now not heritage 伝 son で あ る G93ASOD1 - different heritage 伝 son を 発 now ベ ク タ ー に group み 込 み, こ れ を エ レ Youdaoplaceholder0 トロポレ ショ ショ た た. ハ イ グ ロ マ イ シ ン で patience ES cells を sentaku し て, 50 の patience ES cells ク ロ ー ン の in か ら HA タ グ で ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト を line い タ ー ゲ ッ ト heritage 伝 を son settle を 発 now し た ES cells ク ロ ー ン が must ら れ た. Paragraph 2 order と し て 発 now not heritage 伝 son が settle 発 now し た ES cells ラ イ ン に し seaborne て, straight lock し た Short - hairpin タ イ プ の siRNA 発 now ベ ク タ ー を エ レ ク ト ロ ポ レ ー シ ョ ン し て ネ オ マ イ シ ン で shRNA を settle 発 now ES cells を ク ロ ー ン change し た. HA タ グ タ グ で ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト を line い タ ー ゲ ッ ト G93ASOD1 posthumous son 伝 発 now が inhibit さ れ て い る G93ASOD1 - different heritage 伝 son と shRNA の struck が stability 発 し now, paragraph 1 order で 発 now さ せ た G93ASOD1 を have sharper に inhibit し て い る ES cells ク ロ ー ン が cropping で き た. Now こ の ダ ブ ル heritage 伝 son settle 発 now ES cells ク ロ ー ン を ブ ラ ス ト シ ス ト に マ イ ク ロ イ ン ジ ェ ク シ ョ ン し て キ メ ラ マ ウ ス を plural の ク ロ ー ン で cropping し た が, ES の send rate が 悪 く, ト ラ ブ ル シ ュ ー ト と し て paragraph 1 order の ES cells ク ロ ー ン で キ メ ラ マ ウ ス を cropping systems in で あ る.

项目成果

Sequence-dependent and independent inhibition of mutant ataxin 3 by short interfering RNA.

短干扰RNA对突变atataxin 3的序列依赖性和独立抑制。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Annals of Neurology 56
• 作者: Li Y;Yokota T;et al.
• 通讯作者: et al.

RNAiを用いたウイルス性肝炎の遺伝子治療

使用 RNAi 进行病毒性肝炎的基因治疗

• 发表时间: 2004
• 期刊: 医学のあゆみ 208
• 作者: 横田隆徳;水澤英洋;横田隆徳
• 通讯作者: 横田隆徳

神経変性疾患へのRNAiの臨床応用の展望

RNAi在神经退行性疾病中的临床应用前景

• 发表时间: 2004
• 期刊: 最新医学 21
• 作者: 横田隆徳;水澤英洋;横田隆徳;横田隆徳
• 通讯作者: 横田隆徳

IRF-1 and IRF-2 distinctively up-regulate gene expression and production of IL-7 in human intestinal epithelial cells.

IRF-1 和 IRF-2 明显上调人肠上皮细胞中 IL-7 的基因表达和产生。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Mol Cell Biol 24
• 作者: OshimaS;Kanai T;et al.
• 通讯作者: et al.

siRNAを用いたC型肝炎の遺伝子治療

使用 siRNA 进行丙型肝炎基因治疗

• 发表时间: 2004
• 期刊: Molecular Medicine 41
• 作者: 横田隆徳;水澤英洋
• 通讯作者: 水澤英洋