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ジーンターゲティング法で作製した変異マウスによる遺伝病の発症機構の解析

利用基因打靶方法创建的突变小鼠分析遗传病的发病机制

基本信息

批准号：
05454579
负责人：
前田秀一郎
金额：
$ 4.29万
依托单位：
山梨医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至 1995
项目状态：
已结题

项目摘要

血清アミロイドp成分(SAP)は、全てのアミロイドに共通の微量成分として存在し、アミロイド沈着を促進することを示唆する種々の知見が報告されているが、確証はない。先に我々は、家族性アミロイドポリニューロパチー(FAP)のトランスジェニックマウスモデルを用いて、SAPがアミロイド沈着に関与するとしても、その血中濃度は正常値で充分であることを示唆する実験結果を得た。そこで、本研究では、ジーンターゲティング法でSAPを完全に欠損した無SAPマウス株を作製し、これを用いて、SAPがFAPにおけるアミロイド沈着にどう関与するかを明らかにすることを目的に遂行し、以下の結果を得た。1.マウス胚幹(ES)細胞株CCEの由来した129/Sv/Evマウスの遺伝子ライブラリーより単離したsap遺伝子領域を用いて、以下のような置換ベクターを構築した。置換ベクター:5′-flanking region(約1.6kb)及び3′-flanking region(約8.7kb)を含む全sap遺伝子の第2エクソンに、ES細胞で発現するGK(phospho-glyserate kinase)プロモーターに接続したG418耐性遺伝子挿入し、さらに、ES細胞で発現するMCIプロモーターに接続した単純ヘルペスウイルスのtk遺伝子を3′端に結合したもの。2.この置換ベクターをCCE細胞株に導入し、ベクターを取り込んで、G418とFIAUとに耐性となった250コのクローンの中から相同組換えでsap遺伝子に挿入変異が導入された6コの細胞株をサザーンブロット法及びPCR法で選択した。3.これらsap遺伝子に挿入変異をもつES細胞の中から4コを選んでC57BL/6マウスの胚盤胞に注入し、キメラマウスを得た。4.これらキメラマウスの雄とC57BL/6マウスの雌とを交配させ、2匹の雄キメラマウスが生殖細胞のsap遺伝子に挿入変異を持つことを確認した。5.現在、一対のsap遺伝子の一方に変異を持つマウス株同志の交配により、変異sap遺伝子のみをもつ無SAPマウス株の確立を目指している。

The serum albumin component (SAP) is a common trace component in all serum samples. It is present in all serum samples and is known to promote serum albumin deposition. First of all, we found the results of the study on the relationship between SAP and family disease, and the relationship between SAP and family disease, and the relationship between SAP and family disease. This study is aimed at achieving the following results: SAP is completely under control, SAP is under control. 1. The origin of CCE cell line 129/Sv/Ev is to construct the sub-domain of CCE cell line. Substitution:5′-flanking region(about 1.6 kb) and 3′-flanking region(about 8.7 kb), containing the second part of the full sap gene, ES cells developed GK(phospho-glycolate kinase) protocol for G418 resistant gene insertion, and ES cells developed MCI protocol for MCI protocol for G418 resistant gene insertion, and ES cells developed MCI protocol for MCI protocol for G418 resistant gene insertion. 2. The substitution was introduced into CCE cell line, and the selection was made by G418, FIAU, and tolerance to 250 ° C. The same substitution was made by sap gene, and the selection was made by PCR. 3. C57BL/6 cells were injected into the blastoderm cells of the ES cells. 4. C57BL/6 male female male female female 5. Now, one side of the pair of sap genes is holding different views on gay mating, and the heart of the different sap genes is holding different views on the establishment of the SAP strain.