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家族性アミロイドーシスの発症機構と血清アミロイドP成分の関与-ジーンターゲティング

家族性淀粉样变性的发病机制及血清淀粉样蛋白P成分的参与——基因靶向

基本信息

批准号：
05253217
负责人：
前田秀一郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
山梨医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至 1993
项目状态：
已结题

项目摘要

1.マウス胚幹(ES)細胞の血清アミロイドP成分(sap)遺伝子に挿入変異を導入するため、ES細胞の由来した129/Sv//Evマウスの遺伝子ライブラリーからsap遺伝子を単離し、これを用いて、次のようなジーンターゲティングベクターを構築した。[5'-flanking region(約1.8kb)及び3'-flanking region(約2.5kb)を含む全sap遺伝子の第2エクソンに、マウスのES細胞で発現するMC1プロモーターに接続したG418耐性遺伝子を挿入し、さらにMC1プロモーターに接続したヘルペスtk遺伝子を5'端に接続したもの。]2.上記1.のベクターをマウスES細胞に導入して得たG418及びFIAUに耐性の約120個の細胞の各々からDNAを抽出した。3.上記2.のDNAの各々について、PCR法で、ジーンターゲティングの有無を調べた。しかし、変異遺伝子に特異的な2.9kbのフラグメントの増幅は無く、3個に1.6kbのフラグメントの増幅を認めた。そこで、これら3個のクローンについて、DNAをEcoR1制限酵素で切断し、sap遺伝子の5'端をプローブとして、サザーンブロット法で遺伝子標的組み込みの有無を検索した。しかし、内在性の正常sap遺伝子由来の5.8kbのバンドのみを認めた。これら3個のクローンについては、sap遺伝子の3'端をプローブとして、同様にサザーンブロット法で遺伝子標的組み込みの有無を検索する計画である。また、今後さらに多くのG418及びFIAUに耐性のES細胞を調べ、sap遺伝子に挿入変異が導入された細胞株を単離したいと考えている。

1. The serum of ES cells was transformed into different proteins, the origin of ES cells was 129/Sv//Ev, the protein of ES cells was transformed into different proteins, the protein of ES cells was transformed into different proteins, and the protein of ES cells was transformed into different proteins. [The 5'-flanking region(about 1.8kb) and the 3'-flanking region(about 2.5kb) contain the second part of the full sap gene, which is detected in ES cells containing the G418 resistant gene.] 2. 1. DNA was extracted from about 120 ES cells introduced into G418 and FIAU. 3. 2. DNA detection, PCR method, DNA detection and detection For example, the size of a 2.9kb file is larger than the size of a 1.6kb file. The presence or absence of DNA EcoR1 restriction enzyme is detected by the presence or absence of DNA EcoR1 restriction enzyme 5'end of sap gene. 5.8kb of the origin of the intrinsic and normal sap file. The 3 'end of the sap vector is the same as the 3' end of the sap vector, and the 3'end of the sap vector is the same as the 3' end of the sap vector. In the future, many resistant ES cells such as G418 and FIAU will be introduced into the culture medium.