家族性アミロイドーシスの発症機構と血清アミロイドP成分の関与-ジーンターゲティングによる解析

血清淀粉样蛋白 P 成分参与家族性淀粉样变性发病机制 - 基因靶向分析

• 批准号: 04260220
• 负责人: 前田 秀一郎
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04260220/
• 关键词: アミロイドーシス; 血清アミロイドP成分; ジーンターゲティング; 相同DNA間組換え; 胚性幹細胞; 遺伝性疾患; トランスサイレチン(プレアルブミン); トランスジェニックマウス

1.C3H/Heマウスの血清アミロイドP成分(sap)遺伝子領域で、次のようなジーンターゲティングベクターを構築した。[5′flankingregion(約2kb)及び3′-flanking region(約2.5kb)を含む全sap遺伝子の第2エクソンに、マウスの胚性幹(ES)細胞で発現するMC1プロモーターに接続したG418耐性遺伝子を挿入し、さらにMC1プロモーターに接続したヘルペスtk遺伝子を両端に接続したもの。]2.上記1.のベクターをマウスES細胞に導入して得たG418及びgancyclovirに耐性の約240個の細胞の各々からDNAを抽出した。3.上記2.のDNAの各々をEcoR1制限酵素で切断し、sap遺伝子の5′端をプローブとして、サザーンブロット法で遺伝子標的組み込みES細胞株を検索した。この方法では、内在性の正常sap遺伝子は、5.8kbのバンドとして、また、第2エクソンに挿入変異をもつsap遺伝子は、2.6kbのバンドとして検出される。約2.6kbのバンドを認めた6個のクローンについて、PCR法で、ジーンターゲティングの有無を調べた。しかし、変異遺伝子に特異的なフラグメントの増幅が無く、調べた約240個中には遺伝子標的組み込み細胞株は存在しないと結論した。我々は、先に同様の手法を用いてマウスES細胞のトランスサイレチン(ttr)遺伝子に挿入変異を導入した。この場合にはG418及びgancyclovirに耐性となった約130個の細胞のうち、6個が遺伝子標的組み込み株であった。今回の研究結果は、ttr遺伝子領域よりsap遺伝子領域の方がジーンターゲティングの効率が極めて低いことを示している。この点に関して、最近、宿主ES細胞の遺伝子で作製したベクターを用いると、ジーンターゲティングの効率が著しく高まることが報告された。そこで、ES細胞の由来した129/Sv//Evマウスのsap遺伝子で作製したベクターを用いることを計画し、準備を進めている。

1. C3H/H2S serum component (sap) gene subdomain, subdomain. 5′ flanking region (~ 2kb) and 3′-flanking region(~ 2.5kb) were found in embryonic stem (ES) cells containing the full sap gene. MC1 was selected from the G418 resistant gene. MC1 was selected from the G418 resistant gene. 2. 1. DNA was extracted from 240 cells that were resistant to G418 and gancyclovir. 3. 2. DNA restriction enzyme EcoR1 was isolated from the 5′-terminal of sap gene, and the target group of ES cell line was detected. The method includes: intrinsic normal sap sequence, 5.8kb reverse transcription, 5.8kb reverse transcription, 2.6kb reverse transcription, 2.6kb reverse transcription. About 2.6kb of the file name is recognized by six different files, PCR method, and the presence or absence of the file is adjusted. There are about 240 cell lines in the cell line. We have developed a new method for the introduction of ES cells into the genome. In this case, G418 and gancyclovir are resistant to about 130 cells and 6 cells. The results of this study show that the efficiency of ttr gene sub-domain is very low. This is the most recent report on how the gene of the host ES cell works. The origin of ES cells is 129/Sv//Ev, and the sap cells are prepared for use.

项目成果

Episkopou,V.et al.: "Disruption of the Transthyretin Gene Results in Mice weth Depressed Levels of Plasma Retinol and Thyroid Hormone" Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.

Episkopou,V.等人：“转甲状腺素蛋白基因的破坏导致小鼠血浆视黄醇和甲状腺激素水平降低”Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.

yamamura,K.et al.: "in Molecular Approaches to the Study and Treatmen of Human Diseases,Analysis of the Pathological Process of DominantDisease:Familial Amyloidotic Polyneuropathy" (Yoshida,T.O.& Wilson,J.M.,eds.)Elsevier Science Publishers,B.V.,Amsterdam

yamamura，K.et al.：“在人类疾病研究和治疗的分子方法中，显性疾病的病理过程分析：家族性淀粉样多发性神经病”（Yoshida，T.O.

Murakami,T.er al.: "A Novel Transthyretin Mutation Assoceated with Familial Amyloidotic Polyneuropathy" Biochem.Biopys.Res.Commun.182. 520-526 (1992)

Murakami,T.er al.：“与家族性淀粉样多发性神经病相关的新型运甲状腺素蛋白突变”Biochem.Biopys.Res.Commun.182。

Murakami,T.et al.: "Effect of Serum Amyloid P Component Level on Transthyretin-derived Amyloid Deposition in a Transgenic Mouse Model of Familial Amyloidotic Polyneuropathy" Am.J.Pathol.141. 451-456 (1992)

Murakami,T.et al.：“家族性淀粉样多发性神经病转基因小鼠模型中血清淀粉样蛋白 P 成分水平对运甲状腺素蛋白衍生淀粉样蛋白沉积的影响”Am.J.Pathol.141。

Murakami,T.et al.: "A Novel Transthyretin Mutation at Potition 30 (Leu for Val)Associated with Familial Amyloidotic Polyneuropathy" Biochem.Biophys.Res.Commun.187. 397-403 (1992)

Murakami,T.et al.：“与家族性淀粉样多发性神经病相关的第 30 号位置的新型运甲状腺素蛋白突变（Leu 为 Val）”Biochem.Biophys.Res.Commun.187。