一酸化窒素で活性化される腸管平滑筋細胞のアパミン感受性イオンチャンネルの同定

一氧化氮激活的肠平滑肌细胞中 apamin 敏感离子通道的鉴定

• 批准号: 05670096
• 负责人: 北村 憲司
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670096/
• 关键词: ニトロソシステイン; アパミン感受性Kチャネル; 消化管平滑筋細胞; 一酸化窒素; コラゲナーゼ; 単離細胞; アパミン

ニトロソシステイン(NO-Cys)はラット胃平滑筋細胞、ウサギ胃細胞、回腸細胞、門脈細胞において著明なアパミン感受性膜過分極を発生する。そこでこのアパミン感受性過分極に関与するイオンチャネルを同定するため、ラット胃平滑筋細胞および単離化の簡単なウサギ回腸平滑筋細胞を常法通り酵素処理により単離し、NO-Cysで活性化される電流の記録を試みた。通常のホールセル電位固定法では電位依存性電流(Ca,K電流)は記録できた。約10%の細胞で(保持電位0mV)10-20pAの外向き電流が記録できたが、大部分の細胞でNO-Cys(100uM)により誘発される外向き電流は検出出来なかった。細胞内から内因性物質が消失するのを防ぐため、ニスタチンによるホールセル電位固定法でNO-Cysの効果を検討したが、改善は認められなかった。次に酵素処理がなんらかの原因でNO-Cysに対する反応を減弱させる可能性を検討するため、組織標本(ウサギ回腸輪走筋)を用いてNO-Cysで誘発される過分極に対するコラゲナーゼ(0.1-0.3%)、トリプシン(0.1%)の影響を微小電極法により調べた。しかし、両酵素ともNO-Cysで誘発された過分極を抑制しなかった。脱分極刺激により惹起される電位依存性K電流に対して、NO-Cysは増強作用を持たなかった。また細胞内Ca貯蔵部位からのCa遊離に関係ある電流振動は確実に抑制された。しかし、インサイドアウト法により記録されたCa依存性Kチャネル電流にはNO-Cys(10uM)は無効であった。以上のことからNO-Cysで活性化されるKチャネルは少数の細胞にしか存在しない可能性があること、電位依存性KチャネルやCa依存性Kチャネルには作用しないことがわかった。現在上記の可能性を探るため、酵素処理によらない少数細胞標本を作成し、微小電極法により検討中である。

The development of sensitive membrane polarization in smooth muscle cells, gastric cells, ileal cells and portal vein cells was observed in NO-Cys. In addition, it is necessary to record the current of gastric smooth muscle cells and isolated smooth muscle cells by enzyme treatment and NO-Cys activation. The potential-dependent current (Ca,K current) is usually recorded by the potential-fixing method. About 10% of the cells (holding potential 0mV)10-20pA outward current was recorded, most of the cells NO-Cys(100uM) induced outward current was detected. The effect of NO-Cys is discussed and improved by potentiometric fixation. The effect of NO-Cys on enzyme treatment was investigated by microelectrode method. The results showed that NO-Cys could reduce the reaction rate (0.1-0.3%) and decrease the reaction rate (0.1%). The enzyme NO-Cys is induced by the excess of the enzyme. Depolarization stimulation induces potential-dependent K currents, and NO-Cys enhances the effect. The intracellular Ca storage site is not free, and the current vibration is inhibited. For example, if the current is NO-Cys(10uM), it is not recorded. The above mentioned NO-Cys are activated, but a few cells exist, potential-dependent and Ca-dependent. Now, the possibility of enzyme treatment is explored. A small number of cells are produced. The microelectrode method is discussed.

项目成果

Kitamura,K.: "S-nitrosocysteine,but not sodium nitroprusside,prodeces apamin-sensitive hyperpolarization in rat gastric fundus." By.J.Pharmacol.109. 415-423 (1993)

Kitamura,K.：“S-亚硝基半胱氨酸，但不是硝普钠，在大鼠胃底中引起 apamin 敏感的超极化。”

Kitamura,K.: "Electrophysiological Evidences for NO as a NANC neurotransmitter in rat gastric fundus." Proceeding of 1993 Federal Meeting of Korean Basic Medecal Scientists. 106- (1993)

Kitamura,K.：“NO 作为大鼠胃底 NANC 神经递质的电生理学证据。”