塩化アリル、アクリルアミドおよび2,5-ヘキサンジオンによる神経毒性発現機序カレパインによるニューロフィラメントの分解におよぼす影響について

烯丙基氯、丙烯酰胺和 2,5-己二酮诱导的神经毒性机制；对 calepain 神经丝降解的影响

• 批准号: 05670355
• 负责人: 永野 恵
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670355/
• 关键词: 塩化アリル; アクリルアミド; 2,5-ヘキサンジオン; 神経毒性; ニューロフィラメント; カルパイン

塩化アリル(AC)、アクリルアミド(AM)および2.5-ヘキサンジオン(HD)はいずれも神経毒性を有する産業化学物質であり、中毒の病理所見として、神経軸索内にニューロフィラメント(NF)が蓄積することが報告されている。今回は、このNFの蓄積の原因として考えられる、1)上記化学物質によるNF蛋白の修飾の結果としてのcalpainによる正常な分解の抑制、2)上記化学物質が直接calpainを阻害することによるNFの分解抑制の有無について検討した。8週令のWistar系雄性ラット(各群6匹)に、AC(2.0mmol/kg)、AM(0.25mmol/kg)およびHD(2.5mmol/kg)を週5回、約3ヵ月投与し、後肢麻痺を示す神経中毒ラットを作成した。各動物の脊髄よりChiu&Nortonの方法でNF分画(P_2)、内因性のcalpainを含むTriton可溶性分画(S_1)を調製した。incubation mixture(1ml)の組成は0.2mlのP_2 sample(0.5mg proteinに相当)、0.7mlのbuffer(20mM Tris-HC1 〓7.4.5mM 2-ME)、0.1mlの50mM EGTAあるいは50mM Ca^<2+>で、これにcalpainとしては各動物から得られたS_1もしくは市販のcalpain(いずれも使用濃度はあらかじめ検討)を用いた。incubationは各動物につき【.encircled5.】mMEGTA+P_2.、【.encircled2.】5mM Ca^<2+>+P_2,【.encircled3.】5mM Ca^<2+>+P_2+S_1,【.encircled4.】5mM Ca^<2+>+P_2+市販calpainの4チューブを用い、反応開始後30分および60分後にサンプルを取りSDS-PAGEを行なった。また、【.encircled5.】5mM Ca_<2+>+control P2+(AC,AM or HD)S_1および【.encircled6.】5mM Ca^<2+>+(AC.AM or HD)P_2+control S_1の組み合わせを用いることにより、NF(P_2)の修飾の有無およびS1分画のcalpainの阻害の有無を検討した。これまで得られた結果では、1)ACおよびAM中毒ラットにおける脊髄NFの分解のタイムコースには、対照群と比べて変化は観察されなかった。2)HD群では6例中4例でNFの分解が抑制されていた。しかし、今回のSDS-PAGEの結果からは、この所見がHDによるNF蛋白の修飾の結果かあるいはS1に含まれるcalpainの阻害によるものかは明らかではなかった、現在イムノブロット分析によりNFの分解産物の相違について検討中である。また、今後、同様の分析を坐骨神経を用いて検討予定である。

The toxicities of AC, AM and HD were detected by chemical agents, pathologic findings, and NF reports. This time, the cause of the disease is different. 1) the chemical compound NF protein repair results show that the calpain protein has normal decomposition inhibition, and 2) the chemical chemical directly calpain the damage, the NF decomposition inhibition has been detected. 8-year-old Wistar male clones (6 in each group), AC (2.0mmol/kg), AM (0.25mmol/kg) and AM (0.25mmol/kg) were used for 5 times, about 3 months, and the hindlimb numbness showed that the animals were poisoned. The animals were divided into two parts by Chiu&Norton method (NF 2) and internal cause (calpain) including Triton soluble fraction (Sol 1). The incubation mixture (1ml) device is composed of 0.2mlP _ 2 sample (0.5mg protein equivalent), 0.7ml buffer (20mM Tris-HC1 equivalent 7.4.5mM 2-ME), 0.1ml 50mM EGTA buffer (20mM Tris-HC1 equivalent buffer), 50mM Ca ^ & lt;2+> buffer (lt;2+>), 50mM 50mM (lt;2+>), and so on. MMEGTA+P_2, [.encircled5.] mMEGTA+P_2, [.encircled2.] 5mM Ca ^ & lt;2+>+P_2, [.encircled3.] 5mM Ca ^ & lt;2+>+P_2+S_1, [.encircled4.] 5mM Ca ^ & lt;2+>+P_2+ market, calpain 4.] SDS-PAGE bank account was collected 30 minutes and 60 minutes after the start of the revolt. [.encircled5.] 5mM Ca_<2+>+control P2+ (AC,AM or HD) Song1