ゲルゾリンのアクチン繊維キャップ機構について

关于凝溶胶蛋白的肌动蛋白纤维帽机制

基本信息

批准号：
05680583
负责人：
土居幸雄
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto Women's University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05680583/
关键词：
ゲルゾリンアクチンアクチン結合タンパク質細胞骨格

项目摘要

アクチンは細胞骨格の一種として広く真核細胞に分布しており、細胞形態の保持や変化、細胞運動、細胞分裂など細胞活動の全般にわたり深く関与している。アクチンのこれらの働きは、種々のアクチン調節タンパク質により制御されている。ゲルゾリンはアクチン繊維を切断し、その+末端に留まりその後のアクチン重合を阻害(キャップ)したり、G-アクチンの重合の際にはアクチンの「核」を安定化させる作用を持つ。ゲルゾリンは広く哺乳動物に存在し、Caやフォスファチジルイノシトールポリリン酸などによりそのアクチン結合能が影響を受けるので、アクチン繊維の形成・脱重合の制御における一つの要と考えられている。本研究では、ゲルゾリンの作用機作解明を目的とし、ゲルゾリンの持つ多様な機能のうち、特にアクチン繊維のキャップ構造の詳細を調べた。・ゲルゾリンが結合しているアクチン2分子は、F-アクチンの軸に沿った「縦」2つのサブユニットか、軸に直交する「横」2つのサブユニットか不明である。アクチンのCys374とLys191とを架橋した「横」のアクチン二量体はゲルゾリンと強く結合したので、報告されているように、酵素を用いて光架橋剤をアクチンのGln41に導入し、縦の2つのアクチン分子を固定化を試みたが、ゲルゾリンとの相互作用を調べるのに十分量の二量体は精製できなかった。・トランスグルタミナーゼを用いてゲルゾリンに蛍光物質(ダンシル)の導入を試みたところ、カルシウム存在下で平均1個の標識が入り、導入部位を決定したところ、ゲルゾリンのGln393にダンシルが導入されたことが確認された。このダンシルゲルゾリンを供与体として、Cys374にローダミンの導入されたアクチンを受容体として用い、蛍光エネルギー移動を測定したところ、アクチン-ゲルゾリン複合体におけるこれらの残基間の距離は34Aと求められた。

肌动蛋白是一种广泛分布在真核细胞中的细胞骨架，并深深地参与细胞活性，包括细胞形态保留和变化，细胞运动和细胞分裂。肌动蛋白的这些作用受多种肌动蛋白调节的蛋白质调节。凝胶素裂解肌动蛋白纤维保持其 +末端，并抑制（CAPS）随后的肌动蛋白聚合，并在G-肌动蛋白聚合过程中稳定肌动蛋白“核”。凝胶素广泛存在于哺乳动物中，其肌动蛋白结合能力受CA，磷脂酰肌醇聚磷酸盐等的影响，类似物等，被认为是控制肌动蛋白纤维形成和去聚合的关键因素之一。在这项研究中，我们旨在阐明凝胶素的作用机理，并研究凝胶素蛋白的各种功能中的肌动蛋白纤维的CAP结构的细节。 - 目前尚不清楚凝胶素与F-肌动蛋白的轴或两个垂直于轴的F-肌动蛋白轴的两个“纵向”亚基是两个“纵向”亚基。交联的肌动蛋白Cys374和Lys191与凝胶蛋白密切结合的“水平”肌动蛋白二聚体，正如报道的，使用一种酶固定酶以将两个垂直肌动蛋白分子固定在肌动蛋白的量中，但对dime的量不足以调查其相互作用，将光叠液链接引入了肌动蛋白GLN41中。 - 当我们尝试使用转谷氨酰胺酶将荧光物质（Dansyl）引入凝胶蛋白时，在钙的存在下平均将一个标记放置在一个标签中，当确定引入位点时，已确认已将丹赛基因引入了GLN393凝胶蛋白。将此丹甘糖蛋白作为供体和肌动蛋白与杜鹃胺一起引入Cys374作为受体，测量荧光能量转移，并确定肌动蛋白凝血素络合物中这些残基之间的距离为34a。