腎臓KチャンネルcDNAのクローニング

肾K通道cDNA的克隆

• 批准号: 06454354
• 负责人: 鈴木 誠
• 金额: $ 4.86万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06454354/
• 关键词: ホモロジー; アイソフォーム; ファミリー

腎集合管より単離された、pH感受性のK channel(RACTK1)を用いホモロジークローニングを試みた。40種類のPCR増幅産物よりホモロジーの高い物から、低い物10種類についてラット腎cDNAライブラリーをスクリーニングし、3つのcDNAが単離された。しかし、1つはchannelとは無関係でtransposonの1つであった。1つは、Shaker K channelの一部にホモロジーを有する678塩基95アミノ酸をコードする2回膜貫通構造を有する蛋白であるが、K channel特有のアミノ酸配列は有していない。現在この蛋白について、発現などを検討中である。今1つのcDNAはRACTK1と90%以上のホモロジーを有し、exonskippingを有した940塩基であった。サザンブロットの結果は、RACTK1と同一のRFLPでisoformと考える。ゲノム上でのsplicingを検討するためにPCRを行ったが、exon内のskippingの可能性もあり、またtissue specificなisoformの可能性もあり、この点を明らかにするために現在ゲノムのクローニングと発現を進めている。また同じisoformは人よりも得られている。さらに新しいファミリーの検索としてPCR増幅の位置を膜貫通部位に変更し検討しているが、この場合は増幅産物の期待値が大きくmismatchの増幅産物になる可能性がある。腎外臓器についても検討し、免疫染色ではRACTK1が存在しない臓器からもホモロジーの高いプローベが得られた。結論;3つのcDNAが単離された。Alternative splicing typeのRACTK1が得られた。さらに腎外臓器では、期待できるプローベが得られcDNAを単離中である。ホモロジーの低い産物についても検討できた。

The renal collecting duct is isolated and the pH sensitive K channel (RACTK1) is tested using the renal collecting duct. 40 types of PCR amplification products, including 10 types of high-quality products and low-quality products.ラットcDNAライブラリーをスクリーニングし, 3つのcDNAが単利された.しかし、1つはchannelとはNo relationshipでtransposonの1つであった. K channel Channel's unique acid combination is the same. Now the protein is the same as the current one, and the current one is the current one. Now 1つのcDNAはRACTK1 and more than 90% of the のホモロジーを有し, exonskipping を有した940婩基であった.サザンブロットのRESULTは, RACTK1と SameのRFLPでisoformとtestえる.ゲノム上でのsplicingを検问するためにPCRを行ったが、exon inner skippingのpossibilityもあり、またtissue specificなisoformのpossibilityもあり、このPointを明らかにするためにNow ゲノムのクローニングと発 appear を入めている.また同じisoformは人よりも得られている.さらに新しいファミリーの検SO としてPCR Amplification の Position を Film Penetration Part に変 Update し検 Discussion しているが、このoccasionはincreased productのexpectation値が大きくmismatchのincreased productになるpossibilityがある. The external renal organ was detected, and the immunostaining was performed on the presence of RACTK1. Conclusion; 3つのcDNAが単利された. Alternative splicing typeのRACTK1が得られた. The external kidney organ is the same, and the expectation is that the cDNA will be separated from the middle. The product of ホモロジーのlow is low and the product is low.