ラットグロビン遺伝子群におけるLCRと近位プロモーター領域との相互作用の解析

大鼠珠蛋白基因组LCR与近端启动子区相互作用分析

• 批准号: 07670155
• 负责人: 岡崎 太郎
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07670155/
• 关键词: globin gene; locus control region; promoter; gene expression; repressor; CAT assay; rat

本研究は単年度申請であっるが、我々がこれまでに構造を明かにしてきた多様なラットグロビン遺伝子群におけるLCR及び近位プロモーター領域の構造ならびに発現調節さようについて諸種の解析を行い、以下の成果を得た。1.PCR法を用いて、ラットβ-グロビン遺伝子群の5′-上流約4.2kb及び6.0kbにLCR Site 1(HS-1)及びsite2(HS-2)の存在を確定し、それぞれの塩基配列を決定した。両siteはいずれもヒトおよびマウス遺伝子の対応領域と高いhomologyを示し、この領域が進化上良く保存されていた。また諸種の重要なelementがいずれも存在し、機能的にもactiveであることが示唆された。一方、グロビン遺伝子5′-末端よりの距離が上記の2種属に比して短く、むしろ鳥類に近似していたが、その理由は不明である。^<II>β、^<III>β、及び^Oβ遺伝子の5′上流約1-4kbまでの塩基配列を決定し、この領域について諸種のdeletion mutantを作成、CAT assayによって転写活性の測定を行った。その結果、(1)3種のグロビン発現の量的相違は基本的に-120bp近傍までに存在するbasic promoter (TATA,CCAAT,CACCC,β-DRE)に依存すること、またこの活性はtissue-independent(MEL,K562,HeLa)であることが明らかになった。(2)さらに上流-250bpまでについて同様にCAT assayによる解析を行ったところ、^<II>β、^<III>β、及び^Oβ遺伝子のいずれにも共通の配列を有するrepressor elementが見いだされた。また、gel shift assayの結果から、これらには同一の転写因子が作用することが示唆された。(3)さらに上流1kb付近には、^<II>β遺伝子に特異的なPu/Pyのrepeat sequenceが存在し上記の近位プロモーターに対しnegative作用を有することが明かとなった。

In the course of this study, we applied for the annual application system, and we registered that the sub-group of the multi-party system, the sub-group, the LCR and the near-field system were applied in this study. The following results were approved. In the 1.PCR method, there are determinations and determinants in the subgroup 5-upstream of 4.2kb, 6.0kb LCR Site 1 (HS-1) and site2 (HS-2). In order to improve the performance of the site, it is necessary to improve the performance of the homology in the field and improve the performance. A variety of important element equipment equipment exists, and the mechanical power of the active equipment equipment is used to indicate that it is instigated. On the other hand, the distance between the two parts of the terminal is shorter than that of the other side, and the reason is unknown. The upstream of ^ & lt;II> β, ^ & lt;III> β, and ^ O β substrates is about 1-4kb based on the determination of the number of deletion mutant devices in the field, and the writing activity of the CAT assay filter is determined. The results showed that: (1) the relative quantities of the three kinds of compounds were similar to those of the basic 120bp proximal compounds. There were two kinds of basic promoter (TATA,CCAAT,CACCC, β-DRE) dependent bands, one of which was tissue-independent (MEL,K562,HeLa), and the other was sensitive. (2) in the upper 250bp, the same CAT assay will be parsed. Lines such as repressor element, lt;II> β, ^ & lt;III> β, and ^ O β will be assigned to the column "repressor element". The results of the data, gel shift assay results, and the results show that the same writing factor has the same effect. (3) the Pu/Py repeat sequence of the high-end 1kb and the special Pu/Py of the ^ & negative β has the function of "proximity", "proximity" and "negative".

项目成果

Iwahara,Shin-ichiro: "Identification of five embryonic hemoglobins of rat and ontogeny of their constituent globins during fetal development" J.Biochem.119. 360-365 (1996)

Iwahara，Shin-ichiro：“大鼠五种胚胎血红蛋白的鉴定及其在胎儿发育过程中组成球蛋白的个体发育”J.Biochem.119。

亀山元帥: "ラットβ-グロビン遺伝子locus control region site 1及びsite2の構造解析" 日本医科大学雑誌. 63(印刷中). (1996)

龟山元帅：“大鼠β-珠蛋白基因座控制区位点1和位点2的结构分析”，日本医科大学学报63（出版中）。

奥村 敏: "ラットadult型グロビン遺伝子の5′上流領域の解析" 日本医科大学雑誌. 63(印刷中). (1996)

Satoshi Okumura：“成年大鼠球蛋白基因 5 上游区域的分析”，日本医科大学杂志 63（出版中）。