TGF-βレセプター抗体による伊東細胞活性化の抑制とその臨床応用

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1. TGF-βII型レセプターのN末端150個に相当する塩基配列を持った遺伝子を用いて作成したリコンビナント抗原でウサギとマウスでそれぞれポリクロナール抗体とモノクロナール抗体を作成した.Western blotting法にて,いずれの抗体もリコンビナント抗原および精製TGF-βII型レセプフタ-蛋白質(Santa Cruz製)を認識したが,我々の確認し得たTGF-βレセプター高発現細胞株を用いた免疫組織染色法による検討では抗TGF-βII型レセプターポリクローナル抗体が有用であった.しかしながら,作成した種々の抗体を用いてTGF-βの生理活性が阻止できるか否かについて検討したところ,いずれの抗体ともTGF-β中和活性は認められなかった.2.慢性肝炎および肝硬変患者での組織内TGF-βレセプター発現について検討した結果,肝実質細胞では弱い発現が見られたのに対して,活性化伊東細胞および繊維芽細胞においてより強い発現がみられた.ヒト伊東細胞を用いてその活性化阻害効果についても検討したが,本抗体による阻害効果は認められなかった.3.ヒト由来の伊東細胞の培養上清中の各種サイトカインを測定した結果,TGF-βとIL-6およびCSF-1の産生がみられ,TGF-βレセプターもI型およびII型とも発現が確認された.さらに,伊東細胞にTGF-βを添加すると,ラミニンやヒアルロン酸およびIV型コラーゲンの産生は増加し,形態変換の指標であるα型アクチンの発現も亢進していた.しかし,TGF-βと同時にTGF-βレセプター抗体を添加しても上述した伊東細胞の活性化の抑制は認められなかった.