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単離心筋細胞および遺伝子発現Caチャネルに及ぼす一酸化窒素の病態生理学作用

一氧化氮对离体心肌细胞和基因表达 Ca 通道的病理生理学影响

基本信息

批准号：
07670808
负责人：
西村昌雄
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Teikyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07670808/
关键词：
Caチャネル一酸化窒素活性酸素

项目摘要

はじめに、ウサギ及びモルモット単離心室筋細胞にWhole cell clamp法を応用し、Ca電流またはBa電流を測定、NO供与体を作用させたが、有為な変化は見られなかった。そこで、β受容体刺激(Isoproterenol 1μM)により同電流を増大させた後NO供与体を作用させると、SNP 1μMでは25±3%、SNAP10μMでは30±9%の抑制が見られた。この抑制はNO scavergerであるCarboxy-PTIO1μMを添加すると減弱した(n=5)。次に、ウサギ心筋L型Caチャンネルを発現させたアフリカ爪蛙卵母細胞のBa電流に及ぼす効果を検討した。本系ではdibutyl c-AMP, forskolin, IBMX等でBa電流の増大は認められず、Rp-cAMPで同電流の抑制も認めなかった.従って細胞内PKAを介するCaチャンネルの調節は欠如していると考えられた。この系にNO供与体を作用させるとSNP 1μMでは12±3%、SNAP 10μMでは15±6%のCa電流抑制が見られた(n=5)。SNAPの抑制はPTIOで減弱した.また、細胞内guanylate cyclaseの抑制剤であるMethylene blue 10μM前処置下では、両薬剤とも抑制作用はほぼ半減し、SNP 1μMでは8.2±3.2%、SNAP 10μMでは7.0±6.4%の抑制となった(n=5).従って、2種のNO供与体は、NOの作用を介して心筋L型Caチャンネルを抑制し、この作用は細胞内PKAの作用がなくても認められ、細胞内PKGに依存すると考えられた.一方、活性酸素生成剤であるt-butyl hydroperoxideはモルモット単離心筋心室筋細胞のCa電流を抑制し、この抑制は非特異的リン酸化酵素阻害剤であるH7作用下では減弱した.従って、活性酸素による心筋Caチャネル抑制(傷害)は、細胞内リン酸化酵素活性に依存する事が示唆された.

The Whole cell clamp method is used to measure Ca current, Ba current, NO donor and NO donor. When stimulated by Isoproterenol (1μM), the NO donor effect was 25±3% and SNAP inhibition was 30±9% respectively. The inhibition of NO was reduced by addition of Carboxy-PTIO1μM (n=5). In addition, the development of L-type Ca ~(2 +)-induced apoptosis in frog oocytes was investigated. In this system, dibutyl c-AMP, forskolin, IBMX, etc. increase the current of Ba and decrease the current of Rp-cAMP. The regulation of intracellular PKA mediated Ca ~(2 +) metabolism is not well understood. In this system, NO donors act on Ca current suppression by 12±3% for SNP 1μM and 15±6% for SNAP 10μM (n=5). SNAP and PTIO are weak. Inhibitors of intracellular guanylate cyclase decreased by 8.2±3.2% at 1μM of SNP and 7.0±6.4% at 10 μ M of SNAP (n=5). The role of NO in the inhibition of L-type Ca ~(2 +) metabolism and the role of intracellular PKA in the inhibition of intracellular PKG metabolism were investigated. One side, the active acid production agent is not t-butyl hydroxide, but the Ca current of the ventricular muscle cells is inhibited. The inhibition is not specific to the acid enzyme inhibitor. The inhibition is weakened by H7. The inhibition of cardiac Ca production (injury) by the activation of enzymes and the dependence of intracellular enzymes on activity are indicated.