腎糸球体・尿細管細胞の細胞内情報伝達におけるイノシトール3燐酸受容体多様性の役割

肌醇三磷酸受体多样性在肾小球和肾小管细胞内信号传递中的作用

• 批准号: 07671260
• 负责人: 林 松彦
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07671260/
• 关键词: イノシトール3リン酸; イノシトール3リン酸受容体; 腎臓; 免疫組織化学; カルシウムイオン; 共焦点レーザー顕微鏡; 血管平滑筋

1.IP_3受容体の腎臓内局在の検討イノシトール3リン酸(IP_3)受容体のタイプ1、タイプ2、タイプ3の各タイプに特異的なマウスモノクローナル抗体を作成し、ラット腎臓における免疫組織を行い、IP_3受容体の腎臓内の局在を検討した。タイプ1は血管平滑筋細胞とメサンギウム細胞に発現していた。タイプ2は集合管間在細胞に特異的に発現していた。タイプ3は血管平滑筋細胞、皮質集合管主細胞に発現しており、少量がメサンギウム細胞に発現していた。また、タイプ3の皮質集合管主細胞での発現は基底膜側細胞質に局在していた。このようにIP_3受容体の腎臓における発現は細胞特異的であり、腎臓の細胞の生理機能に深く関わっている可能性が示唆された。2.培養平滑筋細胞における細胞内Ca^<2+>濃度変化の局在の検討Wistarラットの大動脈より採取しクローン化した平滑筋細胞を用いて、IP_3をsecond messengerとする種々の内分泌因子による、細胞内Ca^<2+>濃度の変化の細胞内局在を検討した。培養細胞を潅流槽で持続的に緩衝液による潅流し、PDGF、vasopressin、アンジオテンシンIIを添加した。細胞内Ca^<2+>濃度はINDO-1-AMを用いて、共焦点レーザー顕微鏡により経時的に細胞内の一断面を蛍光側光した。上記の刺激因子に対して、同一の細胞の同一の断面で測定を行い、その変化を空間的に観察した。PDGFと、vasopressin、アンジオテンシンIIは活性化するphospholipaseのタイプが異なることより、細胞内Ca^<2+>濃度の上昇する部位が、各々の物質により同一の細胞内でも異なることが期待されたが、培養平滑筋細胞では、その上昇部位に全く差を認めなかった。腺細胞などで報告されている、細胞内Ca^<2+>濃度の波動現象もみられず、平滑筋細胞のように極性を持たない細胞ではその動態が大きく異なると考えられた。

1. IP_3 bureau in the let body の kidney is crucial in の beg イ 検 ノ シ ト ー ル 3 リ ン acid (IP_3) by the capacity of body の タ イ プ 1, タ イ プ 2, タ イ プ 3 の タ イ プ に specific な マ ウ ス モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody を し, consummate ラ ッ ト renal viscera に お け る immunohistochemical を い, IP_3 の bureau in the let body の kidney is crucial in を beg し 検 た. Youdaoplaceholder0 プ1 プ vascular smooth tendon cells とメサ ギウム ギウム cells に present て て た た た. Youdaoplaceholder0 タ プ2 プ the <s:1> collection ducts have に specific に occurrences in cells, and there are also に て た た た. タ イ プ 3 は vascular smooth muscle cells, cortex manifold に 発 now し て お り, a small amount of が メ サ ン ギ ウ ム cells に 発 now し て い た. Youdaoplaceholder0, タ プ プ3. The main cells of the cortical collecting duct で are present, and the に cytoplasm on the side of the basement membrane is located in て て た た. こ の よ う に IP_3 by let body の renal viscera に お け る 発 now は cell specific で あ り の is crucial, kidney の cell physiology に deep く masato わ っ て い が る possibility in stopping さ れ た. 2. Cultivate smooth muscle cells に お け る intracellular Ca ^ - > < 2 + concentration change の bureau in の 検 for Wistar ラ ッ ト の artery よ り take し ク ロ ー ン change し た を smooth muscle cells with い て, IP_3 を second Messenger と す る kind 々 の endocrine factors に よ る, intracellular Ca ^ 2 + < > concentration の variations change の cells inside bureau in を beg し 検 た. Cultured cells を 潅 chute で hold 続 に buffer に よ る 潅 flow し, PDGF, vasopressin, ア ン ジ オ テ ン シ ン II を add し た. Concentration of intracellular Ca ^ 2 + > < は INDO - 1 - AM を with い て, total focus レ ー ザ ー 顕 micromirror に よ り 経 の に cell of a cross section を 蛍 side light し た. The <s:1> stimulating factor に was used to measure を of て, で of the same <s:1> cell <e:1> and the same <s:1> section で, and to conduct に観 observation of に観 in the <s:1> variation を space and た た. PDGF と, vasopressin, ア ン ジ オ テ ン シ ン II は activeness す る phospholipase の タ イ プ が different な る こ と よ り, intracellular Ca ^ 2 + < > concentration rising の す が る parts, various 々 の material に よ り same の intracellular で も different な る こ と が expect さ れ た が, cultivate smooth muscle cells で は, Youdaoplaceholder0 そ rising part に all く difference を recognize めな った った Intratumor な ど で report さ れ て い る, intracellular Ca ^ の > < 2 + concentration fluctuations も み ら れ ず, smooth muscle cells の よ う に polarity を hold た な い cells で は そ の dynamic が big き く different な る と exam え ら れ た.