イノシトール3リン酸受容体の、リガンド結合に伴う構造の動的変化

配体结合后肌醇三磷酸受体结构的动态变化

• 批准号: 07268202
• 负责人: 御子柴 克彦
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07268202/
• 关键词: IP_3; IP_3レセプター; カルシウムイオン; 情報伝達; カルシウムチャネル; 小胞体; セカンドメッセンジャー

イノシトール三リン酸受容体(IP_3R,2749アミノ酸)のアミノ末端側650アミノ酸内には、リガンドであるイノシトール1,4,5-三リン酸(1,4,5-IP_3)を特異的に認識する領域が含まれていることが知られている。我々は、IP_3Rのリガンド結合領域を大腸菌で発現する系を確立し、リガンド結合活性を欠く部位特異的アミノ酸置換変異体を作製し、リガンド結合に関与するアミノ酸を決定した。更に、種々の欠失変異体を作製し、リガンド結合に必要な領域を特定した。さらに、この領域内に部位特異的変異を導入し、リガンド結合活性とイノシトールポリリン酸の結合選択性を解析した。その結果、1アミノ酸の置換により1,4,5-IP_3に対する親和性は低下するが、2,4,5-IP_3に対する親和性は変化せず、結果として1,4,5-IP_3と2,4,5-IP_3を同等の親和性で認識する変異体が得られた。また、1,4,5-IP_3に対してより高い親和性を示す変異体も得られた。

Three リ イ ノ シ ト ー ル ン acid by let body (IP_3R, 2749 ア ミ ノ acid) の ア ミ ノ side at the end of 650 ア ミ ノ acid in に は, リ ガ ン ド で あ る イ ノ シ ト ー ル 1, four, five - three リ ン acid (IP_3), four, five を specific に know す が contain ま る field れ て い る こ と が know ら れ て い る. I 々 は, IP_3R の リ ガ ン ド combining domain を coliform で 発 now す る を established し, リ ガ ン ド binding activity を owe く site specific ア ミ ノ acid replacement - variant を as し, リ ガ ン ド combining に masato and す る ア ミ ノ acid を decided し た. More に, 々 の owe lost - variant を as し, リ ガ ン ド combining に な necessary field を specific し た. さ ら に, こ の に site specific variations in the field of vision を import し, リ ガ ン ド binding activity と イ ノ シ ト ー ル ポ リ リ ン acid の sentaku sex を parsing し た. そ の results, 1 ア ミ ノ acid の replacement に よ り 1, four, five - IP_3 に す seaborne る low affinity は す る が, two, four, five - IP_3 に す seaborne る affinity は variations change せ ず, results と し て 1, four, five - IP_3 と two, four, five - IP_3 を equal の affinity で know す る - variant が must ら れ た. Youdaoplaceholder0, 1,4, 5-ip_3 に have a high <s:1> affinity for <s:1> てよ に を indicates that す variants また give られた.

项目成果

Matsumoto,M.et al.: "Ataxia and epileptic seizures in mice lacking type 1 inositol 1,4,5-trisphosphate receptor." Nature. 379. 168-171 (1996)

Matsumoto,M.et al.：“缺乏 1 型肌醇 1,4,5-三磷酸受体的小鼠出现共济失调和癫痫发作。”

Ogawa,M.et al.: "The reeler gene-associated antigen on cajal-retzius neurons is a crucial molecule for laminar organization of cortical neurons." Neuron. 14. 899-912 (1995)

Okawa,M.等人：“cajal-retzius 神经元上的 reeler 基因相关抗原是皮层神经元层状组织的关键分子。”

Hirota,J.et al.: "Genes for development,cell growth and infectious diseases(A decade of Pasteur Riken collaboration)" John Libbey EUROTEXT, 262(81-96) (1995)

Hirota,J.et al.：“发育、细胞生长和传染病的基因（巴斯德理研十年合作）”John Libbey EUROTEXT，262(81-96) (1995)

Fukuda,M.et al.: "Role of the C2B domain of synaptotagmin in vesicular release and recycling as determined by specific antibody injection into the squid giant synapse preterminal." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 92. 10708-10712 (1995)

Fukuda, M.等人：“通过将特异性抗体注射到鱿鱼巨突触前末端来确定突触结合蛋白的 C2B 结构域在囊泡释放和再循环中的作用。”

Hirota,J.et al.: "Kinetics of calcium release by immunoaffinity-purified inositol 1,4,5-trisphosphate receptor in reconstituted lipid vesicles." J.Biol.Chem.270(32). 19046-19051 (1995)

Hirota,J.et al.：“免疫亲和纯化的肌醇 1,4,5-三磷酸受体在重组脂质囊泡中释放钙的动力学”。