バイオテクノロジーを利用した好酸球顆粒蛋白質の大量調整と好酸球機能及び分化の解析

利用生物技术对嗜酸性粒细胞蛋白进行质量调节以及嗜酸性粒细胞功能和分化分析

基本信息

  • 批准号:
    07807062
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.28万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1995
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1995 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

[1]好酸球増多症モデルを活用してラットmajor basic protein (MBP)の精製行い、部分アミノ酸配列を明らかにした。さらに、得られた情報を基に、MBPのcDNAクローニングを以下に述べる方法で行った。好酸球増多症を誘発させたラットの骨髄から骨髄細胞を採取し、AGPC法によりtotal RNAを調整し、RT-PCR法によってMBPのcDNAの部分塩基配列を決定した。その結果、約240bpのPCR産物が得られ、その塩基配列にはヒトおよびモルモットのMBPの対応する部分と高い相同性が認められた。これらの塩基配列をもとにプライマーを作製し、3'および5'RACE法によりラットMBP cDNAの全長の塩基配列を決定した。ラットMBPのcDNAは全長が867bpで5'noncoding regionが45bp、coding regionが684bp (signal peptide、proprotein、mature MBPの合計領域)、3'coding regionが125bp (poly A tailを含む)であった。現在、RT-PCR法によりラットMBPの全長のcDNAをもつプラスミドを作製し、recombinant MBPを作製するための準備を行っている。[2]精製したラットMBPをウサギに投与することにより、極めて特異性の高い抗体を得ることに成功した。本抗体を用いることにより、ラットを抗原で感作すると、骨髄中にMBP抗体に結合する蛋白質が増加することが明らかになった。また、[1]で作成したプライマーを用いてRT-PCRを行った結果、骨髄細胞中のMBP mRNA量は、感作をすることにより上昇することが明らかになった。従って、ラットを抗原で感作すると、骨髄中で好酸球の分化が亢進し、好酸球増多の準備段階が進行することが示唆された。
[1] good acid ball raised many disease モ デ ル を use し て ラ ッ ト major basic protein (MBP) の refined い, part ア ミ ノ acid with column を Ming ら か に し た. さ ら に, ら れ た intelligence を に, MBP の cDNA ク ロ ー ニ ン グ を に below mentioned べ る line method で っ た. Good acid ball raised many disease を 発 lure さ せ た ラ ッ ト の bone marrow か ら bone marrow cells を し, AGPC に よ り を adjustment し, total RNA rt-pcr method に よ っ て MBP の cDNA の part salt base with column を decided し た. そ の results, about 240 bp が の PCR products ら れ, そ の salt base with column に は ヒ ト お よ び モ ル モ ッ ト の MBP の 応 seaborne す る と high い identity が recognize め ら れ た. こ れ ら の salt base with column を も と に プ ラ イ マ ー を cropping し, 3 'お よ び 5' RACE method に よ り ラ ッ ト MBP cDNA の span の salt base with column を decided し た. Youdaoplaceholder0 MBP cDNA が full length が867bpで5'noncoding regionが45bp, coding regionが684bp (combined domain of signal peptide, proprotein, mature MBP <s:1>), 3'coding regionが125bp (poly A tailを containing む)であった. Now, rt-pcr method に よ り ラ ッ ト MBP の span の cDNA を も つ プ ラ ス ミ ド を as し, recombinant MBP を cropping す る た め の preparation line を っ て い る. [2] the refined し た ラ ッ ト MBP を ウ サ ギ に cast with す る こ と に よ り, extremely め て specificity の high い antibody を る こ と に successful し た. This antibody を い る こ と に よ り, ラ ッ ト を antigen で feeling as す る と, bone marrow in に に MBP antibody combining す る protein が raised plus す る こ と が Ming ら か に な っ た. ま た, [1] で made し た プ ラ イ マ ー を with い を line っ て RT - PCR た results, bone marrow cells の MBP mRNA は, feeling as を す る こ と に よ り rise す る こ と が Ming ら か に な っ た. 従 っ て, ラ ッ ト を antigen で feeling as す る と, bone marrow and ball の differentiation が で good acid in hyperthyroidism し rights, good acid ball の prepare Duan Jie が for す る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

期刊论文数量(16)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Suetsugu Mue, et al.: "Cloning of cDNA for rat eosinophil major basic protein" Biohim. Biophys. Acta.1264. 261-264 (1995)
Suetsugu Mue 等人:“大鼠嗜酸性粒细胞主要碱性蛋白 cDNA 的克隆”Biohim。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Kazuo Ohuchi, et al.: "Enhancement by cyclo-oxygenase inhibitors of platelet-activating factor production in thapsigargin-stimulated macrophages" Br. J. Pharmacol.116. 2141-2147 (1995)
Kazuo Ohuchi 等人:“环加氧酶抑制剂增强毒胡萝卜素刺激的巨噬细胞中血小板激活因子的产生”Br。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Kazuo Ohuchi et al.: "Dexamethasone inhibits production of macrophage inflammatory protein 2 in the leukoytes in rat allergic inflammation" Eur.J.Pharmacol.284. 257-263 (1995)
Kazuo Ohuchi 等人:“地塞米松抑制大鼠过敏性炎症白细胞中巨噬细胞炎症蛋白 2 的产生”Eur.J.Pharmacol.284。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Suetsugu Mue, et al.: "Leukocyte-derived neutrophil chemotactic factor-2 produced by infiltrated leukocytes in allergic inflammation model in rats is macrophage inflamatory protein-2" Immunol. Invest.24. 757-764 (1995)
Suetsugu Mue 等人:“大鼠过敏性炎症模型中浸润白细胞产生的白细胞衍生的中性粒细胞趋化因子 2 是巨噬细胞炎症蛋白 2”。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Suetsugu Mue, et al.: "Characterization of leukocyte-derived neutrophil chemotactic factor-2 and its possible roles in neutrophil infiltration in allergic inflammation in rats" Int. Arch. Allergy Immunol.108. 148-157 (1995)
Suetsugu Mue 等人:“白细胞来源的中性粒细胞趋化因子 2 的表征及其在大鼠过敏性炎症中中性粒细胞浸润中的可能作用”Int。
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